雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是預防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。
雞傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫）

雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是預防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。

    雞傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫)適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性支氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評估雞群感染IBV的風險程度；了解雛雞母源抗體水平，為IBV免疫程序的制定提供參考。

【原    理】

    雞傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫)由預包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。

【試劑盒組成】

序號	名稱	規(guī)格/96T×1	規(guī)格/96T×2	規(guī)格/96T×5
1	酶標記物	11ml×1(紅蓋)	11ml×2(紅蓋)	26ml×2(紅蓋)
2	樣品稀釋液	50ml×1(黃蓋)	50ml×1(黃蓋)	200ml×1(黃蓋)
3	20X濃縮洗滌液	40ml×1(白蓋)	40ml×1(白蓋)	200ml×1(白蓋)
4	底物液A	6ml×1(白蓋)	11ml×1(白蓋)	26ml×1(白蓋)
5	底物液B	6ml×1(黑蓋)	11ml×1(棕蓋)	26ml×1(黑蓋)
6	終止液	6ml×1(黃蓋)	11ml×1(黃蓋)	26ml×1(黃蓋)
7	陽性對照	1.0 ml×1(紅蓋)	1.5 ml×1(紅蓋)	2.0 ml×1(紅蓋)
8	陰性對照	1.0 ml×1(綠蓋)	1.5 ml×1(綠蓋)	2.0 ml×1(綠蓋)
9	酶標板	96T×1	96T×2	96T×5
10	蓋板膜	1	2	5
11	自封袋	1	1	2
12	說明書	1	1	1
13	稀釋板	1	2	5

 

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清先按10倍稀釋（如在稀釋板中加入90μl樣品稀釋液再加10μl血清，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl，再加入稀釋后的血清10μl。

注：樣本稀釋比例相當于1:100。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。

【檢驗結果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）。

2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。

3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當時的抗體水平，根據(jù)結果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。