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液相壓力波動
在正常情況下，HPLC一般的壓力波動范圍在5%以內(nèi)，而UPLC可達(dá)1以內(nèi)。壓力波動大會導(dǎo)致目標(biāo)物質(zhì)保留時間漂移，從而影響分析結(jié)果的重現(xiàn)性。今天，就跟著小編來看看如何找到引起波動的原因。

溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞，溶劑未脫氣，泵的密封墊老化，出口單向閥失效，主動閥失效。
常見的原因是：泵內(nèi)有氣泡
排氣泡原因
平衡方法前灌注不充分，管路中有氣泡，會引起壓力波動。因此充分的灌注是液相正常運(yùn)行的基礎(chǔ)。 
有時候，溶劑濾頭不清潔也會導(dǎo)致氣泡容易被吸進(jìn)管路造成壓力波動。如懷疑濾頭，可在保溶劑潔凈的前提下，拔下溶劑濾頭，將溶劑管路直接放入溶劑瓶排查。確認(rèn)溶劑濾頭臟時可超聲清洗。

小貼士
溶劑濾頭在流動相進(jìn)入溶劑管路之前，起到過濾流動相中固體顆粒保護(hù)儀器的作用。如果溶劑品質(zhì)不佳，長期使用會引起濾頭堵塞，進(jìn)而導(dǎo)致氣泡易被吸進(jìn)系統(tǒng)而引起壓力波動。

清洗步驟

1色譜純異丙醇超聲清洗10 min
2色譜級甲醇和超純水各50%超聲清洗15 min
如果按照上述步驟清洗后效果不佳，可使用30%的色譜級磷酸超聲清洗15 min～30 min。需要注意的是，使用磷酸后，應(yīng)使用超純水反復(fù)清洗濾頭直至pH呈中性，再用色譜純甲醇超聲浸潤后裝回。

觀察壓力波動范圍
若排氣泡原因后壓力仍波動，建議觀察波動范圍。
?若壓力曲線呈鋸齒狀，波動范圍較大，甚至降0，多優(yōu)先考慮單向閥粘滯；
?波動范圍相對較小，多在20%以內(nèi)，優(yōu)先考慮泵頭磨損。

單向閥粘滯
懷疑單向閥粘滯時：
? HPLC可以嘗試超聲清洗單向閥，超聲無效時建議換新單向閥；
? UPLC儀器單向閥超聲效果不明顯，一般建議換。

泵頭磨損
泵頭磨損是指泵頭內(nèi)的泵桿與泵桿密封圈磨損。
■ HPLC泵頭磨損
? 未配置柱塞清洗(Seal Wash)管路的HPLC，發(fā)生泵頭磨損時一般可從泵頭底部的小孔觀察到滲液；
? 配置了柱塞清洗管路的HPLC，可通過持續(xù)觀察Seal Wash廢液管來排查，幾秒一滴且持續(xù)的滴液說明有滲漏。

換Alliance泵桿與密封

■ UPLC泵頭磨損
UPLC流速偏低且輕微磨損會產(chǎn)生比較大的壓力波動，所以通過觀察Seal Wash的方法不太適用。推薦用戶做滲漏測試（Leak Test）來判斷。

壓力過低 

可能的原因：溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞，連接管路泄漏或其它備件（泵頭密封墊），溶劑或流速改變，主動閥失靈，四元比例閥失靈，單向出口閥失靈，色譜柱失效（固定相流失）

壓力過高 

可能的原因：柱子進(jìn)口過濾芯被污染，PURGE閥過濾芯被污染，色譜柱被污染，連接管路，尤其是針座毛細(xì)管堵塞，進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥被堵塞，進(jìn)樣針或針座被阻塞。

Tips
1溶劑品質(zhì)不合格或鹽濃度過高析出會引起單向閥粘滯或泵頭磨損。
2溶劑濾頭、單向閥、泵桿及密封均屬于易損易耗件，建議定期換。