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如何選擇紫外可見分光光度計?
閱讀：1611 發(fā)布時間：2020-4-24
自從60年前紫外分光光度計出現(xiàn)在實驗室的工作臺之后，已經(jīng)形成了一種能解決廣泛難題的儀器，從單一波長的測量到高性能多光譜的測量分析。實驗室選擇時需要根據(jù)自己實驗室的需要和目的用途來考慮，光學構(gòu)造和光源、探測方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。
光學構(gòu)造(OPTICALCONFIGURATION)
一般來說，紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過一個斬光輪(mirroredchopperwheel)將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實際樣品?？梢孕』馄?lampdrift)和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度，所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
光源和檢測方法(LIGHTSOURCESANDDETECTION)
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性，研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器，可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學和半導體研究需要的光譜范圍。VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是這樣的儀器。
一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗精確要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
為了測量吸光值，分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes，PMTs)和光敏二極管。PMTs提供快速的反應時間和良好的靈敏度，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
樣品類型(SAMPLEFORMAT)
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求。但盡管對于小實驗室來說，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。
數(shù)據(jù)管理(DATAMANAGEMENT)
大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。
另外一個值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的終使用。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結(jié)果。例如一些藥物機構(gòu)需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價機構(gòu)的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式。