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大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒實驗使用說明書.doc

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  大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒的實驗使用說明書如下:

  1. 實驗目的

  本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的含量?。

  2. 實驗原理

  采用雙抗體夾心法測定標本中大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)水平。用純化的大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,依次加入標本、標準品及HRP標記的檢測抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品濃度?。

  3. 試劑盒組成

  封板膜:2片

  說明書:1份

  密封袋:1個

  標準品:2700ng/L,0.5ml×1瓶

  酶標包被板:1×48或1×96

  樣品稀釋液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  顯色劑A液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  顯色劑B液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  終止液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶?。

  4. 樣本處理及要求

  血清?:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),收集上清?。

  血漿?:使用EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后離心,收集上清?。

  尿液?:無菌管收集,離心后取上清?。

  細胞培養(yǎng)上清?:檢測分泌性成分時,直接收集上清;檢測細胞內成分時,需反復凍融細胞懸液后離心?。

  組織標本?:切割后稱重,加入PBS勻漿,離心后取上清?。

  5. 實驗步驟

  將標準品、標本依次加入包被微孔板中,溫育并洗滌?。

  加入HRP標記的檢測抗體,溫育并洗滌?。

  加入底物TMB顯色,反應終止后測定吸光度(OD值)?。

  根據(jù)標準曲線計算樣品濃度?。

  6. 注意事項

  試劑盒需在-20℃保存,開封后酶標板需密封保存?。

  標本采集后應盡快檢測,避免反復凍融?。

  實驗操作需在相同環(huán)境條件下進行,以減少誤差?。

  7. 結果計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標繪制標準曲線,根據(jù)樣品的OD值計算濃度,再乘以稀釋倍數(shù)?。

  以上為實驗使用說明書的詳細內容,供參考?。

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