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　　大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)如下：

　　BS-3496  大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)elisa試劑盒

　　1. ?實(shí)驗(yàn)原理?

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法測(cè)定樣本中大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。首先用純化的PICP抗體包被微孔板，形成固相抗體。隨后加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，與HRP標(biāo)記的PICP抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。洗滌后加入底物TMB顯色，顏色的深淺與樣本中PICP濃度呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)并計(jì)算濃度?。

　　2. ?試劑盒組成?

　　酶標(biāo)板(預(yù)包被)：96孔

　　標(biāo)準(zhǔn)品：400ng/ml

　　酶標(biāo)抗體工作液：12ml

　　標(biāo)本稀釋液：12ml

　　濃縮洗滌液：50ml

　　TMB底物：12ml

　　終止液：12ml

　　第一抗體工作液：12ml?。

　　3. ?樣本處理?

　　血清/血漿?：采集后1000×g離心10分鐘，分離上清液。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清液?：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒。

　　組織勻漿?：加入生理鹽水搗碎，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清?。

　　4. ?實(shí)驗(yàn)步驟?

　　加樣?：每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本100μl，37℃孵育120分鐘?。

　　洗滌?：用洗滌液充分洗滌4-6次，濾紙印干?。

　　加入第一抗體?：每孔加入第一抗體工作液100μl，37℃孵育60分鐘?。

　　顯色?：每孔加入TMB底物100μl，避光孵育15-30分鐘?。

　　終止反應(yīng)?：每孔加入終止液50μl，立即測(cè)定OD值?。

　　5. ?結(jié)果計(jì)算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)曲線計(jì)算樣本中PICP濃度?。

　　6. ?注意事項(xiàng)?

　　試劑盒需在2-8℃保存，避免反復(fù)凍融?。

　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管?。

　　顯色反應(yīng)需避光進(jìn)行，終止后立即測(cè)定?。

　　7. ?檢測(cè)范圍與靈敏度?

　　檢測(cè)范圍：1.25-80ng/mL

　　檢測(cè)限：0.49ng/mL?。

　　以上為大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的詳細(xì)使用說(shuō)明，適用于科研實(shí)驗(yàn)中的定量檢測(cè)?。