小麥醇溶蛋白ELISA試劑盒是用于檢測植物組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小麥醇溶蛋白含量的重要工具。使用前，需將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，室溫平衡15-30分鐘。實驗時，采用雙抗體夾心法，將純化的小麥醇溶蛋白抗體包被微孔板，加入樣本及HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌后，加底物TMB顯色，顏色深淺與樣品中小麥醇溶蛋白含量正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小麥醇溶蛋白濃度。注意，實驗過程需避免交叉污染，嚴(yán)格按照說明書操作，且不同批號組分不得混用。試劑盒保存于2-8℃，有效期6個月。

　　BS-5040  小麥醇溶蛋白(Gliadin)ELISA試劑盒  天津本生

　　以下是小麥醇溶蛋白(Gliadin)ELISA試劑盒的實驗使用說明書：

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法：用純化的Gliadin抗體包被微孔板，依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。TMB顯色后在450nm波長下測定OD值，顏色深淺與Gliadin濃度呈正相關(guān)?。

　　二、試劑盒組成

　　組分 96孔配置 48孔配置

　　酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條

　　標(biāo)準(zhǔn)品(16μg/mL) 0.5mL×1瓶 0.5mL×1瓶

　　酶標(biāo)試劑 6mL 3mL

　　顯色劑A/B 各6mL 各3mL

　　終止液 6mL 3mL

　　30×洗滌液 20mL 15mL ?

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?：采集后1000×g離心10-30分鐘，避免溶血?

　　細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒?

　　組織勻漿?：用生理鹽水勻漿后離心取上清?

　　保存?：-20℃短期保存，-70℃長期保存，避免反復(fù)凍融?

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行梯度稀釋(建議濃度：0、0.2、1、4、9μg/mL)?

　　加樣?：

　　空白孔：不加樣

　　標(biāo)準(zhǔn)孔：50μL標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：40μL稀釋液+10μL樣本(5倍稀釋)?

　　溫育?：37℃孵育30分鐘?

　　洗滌?：用稀釋后的洗滌液洗板5次，每次靜置30秒?

　　顯色?：每孔加顯色劑A/B各50μL，37℃避光反應(yīng)10分鐘?

　　終止?：每孔加50μL終止液?

　　檢測?：450nm波長讀取OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度?

　　五、注意事項

　　安全防護(hù)?：避免接觸終止液/顯色劑，操作時穿戴防護(hù)裝備?

　　試劑保存?：

　　未開封試劑盒2-8℃保存

　　開封后酶標(biāo)板需密封防潮?

　　質(zhì)量控制?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)孔CV應(yīng)<15%

　　樣本OD值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)?

　　六、技術(shù)參數(shù)

　　檢測范圍?：0.2-9μg/mL(96T)?

　　靈敏度?：<0.1μg/mL?

　　有效期?：6個月(2-8℃保存)?

　　(注：不同品牌試劑盒可能存在細(xì)微差異，請以實際產(chǎn)品說明書為準(zhǔn))

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