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動(dòng)物基因組DNA快速提取試劑盒適合于從新鮮或凍存組織，如培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，血液，唾液，毛發(fā)（含羽毛），鼠尾及鼠耳等動(dòng)物組織中快速提取基因組DNA，用于后續(xù)的基因 型鑒定等PCR分析檢測(cè)。

 

操作步驟：

提前準(zhǔn)備可設(shè)置恒定溫度為 55℃和 95℃的熱蓋金屬浴或者PCR儀；提取試劑A在 2~8℃條件下會(huì)出現(xiàn)絮狀（結(jié)晶）沉淀，為正?，F(xiàn)象，試劑平衡至室溫后可自行消失，不影響使用；使用前取出所有試劑于室溫下平衡，顛倒混勻后備用。

1. 消化液的配制：按照樣本數(shù)量n配制消化液，具體配制方法如下：分別吸取（n× 50µL提取試劑A+n× 2.5µL提取試劑B）加入潔凈離心管中，移液器吹吸充分混勻，分裝至 0.2mL PCR（離心管）中，每孔 52µL（如樣本過(guò)多，可提前預(yù)制，于 2~8℃短暫保存，2 小時(shí)內(nèi)使用）。

 

2. 不同組織樣本基因組DNA的提取：

培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞：將收集到的細(xì)胞除去培養(yǎng)液，吸取消化液充分吹吸重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)移至原消化液孔中。

血液/唾液：吸取不超過(guò) 10µL的血液或者唾液加入消化液中，移液器吹吸混勻。

毛發(fā)（含羽毛）：實(shí)驗(yàn)前用 75%的乙醇沖洗剪刀和鑷子。剪除毛發(fā)（含羽毛）的多余部分，僅需保留毛發(fā)的根部（羽軸中羽根）區(qū)域，并將其盡可能剪碎至消化液中，移液器吹吸混勻。鼠尾/鼠耳：實(shí)驗(yàn)前用 75%的乙醇沖洗剪刀和鑷子。剪取不超過(guò) 0.5cm的小鼠尾尖或耳尖，并將其盡可能剪碎至消化液中，移液器吹吸混勻（一般情況下，重量約為 10mg的 0.5cm長(zhǎng)的鼠尾或鼠耳剛好能浸沒(méi)在含有 50μL消化液的PCR管中）。對(duì)于新鮮的鼠尾或鼠耳，建議盡量在剪下鼠尾或鼠耳后 30 分鐘內(nèi)進(jìn)行基因組DNA提取，否則宜盡快冷凍存放。

 

3. 將樣本置于 55℃熱蓋金屬浴或者PCR儀，孵育 10 分鐘。

4. 將樣本置于 95℃熱蓋金屬浴或者PCR儀，孵育 5 分鐘（孵育結(jié)束后，組織未消化屬于正常現(xiàn)象，不會(huì)影響試劑盒的檢測(cè)效果）。

5. 將上述提取樣本置于-20℃冷卻 5 分鐘，或 4℃冷卻 15 分鐘以上，以避免氣溶膠污染，瞬時(shí)離心后取上清立即進(jìn)行PCR檢測(cè)（若需長(zhǎng)期保存樣本，應(yīng)將未消化的組織去除或將提取物轉(zhuǎn)移到新的離心管中。大部分情況下，提取物 4℃能保存至少 1 個(gè)月，-20℃至少能 保存一年）。