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外泌體的主流共識(shí)---電鏡、NTA和WB實(shí)驗(yàn)
閱讀：828 發(fā)布時(shí)間：2023-8-11外泌體的形狀是杯狀或茶托形，可以通過(guò)電鏡觀(guān)察形態(tài)進(jìn)行初步確定，外泌體的粒徑大小在30-120nm左右，通過(guò)NTA可以檢測(cè)到粒徑大小，外泌體本身具有一些特殊的標(biāo)志蛋白，通過(guò)WB可以檢測(cè)出來(lái)。
目前鑒定外泌體主要包括三方面實(shí)驗(yàn)，但是三方面實(shí)驗(yàn)在鑒定外泌體的存在、數(shù)量和完整性上分別存在一些缺陷。
可以直觀(guān)的看到粒子的形態(tài)，因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性，但是包括支原體、鐵蛋白聚團(tuán)、聚乙二醇蛋白聚團(tuán)、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似，并且電鏡只能展示局部景象。因此，電鏡成像無(wú)法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子，且不能反映樣品中的外泌體數(shù)量。
是一種測(cè)算粒子群體直徑分布和粒子數(shù)量的計(jì)算方法，它通過(guò)光學(xué)原理感知粒子的存在，因此可以確認(rèn)外泌體樣品中的“外泌體"數(shù)量和直徑的群體特征，但是無(wú)法確認(rèn)檢測(cè)到的粒子是否為外泌體，不能反映粒子形態(tài)，無(wú)法將外泌體和其他納米粒子區(qū)分開(kāi)。因此NTA不能確認(rèn)外泌體的真實(shí)存在和外泌體的完整性。
可以鑒定外泌體中存在的特定蛋白，WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白可以說(shuō)明外泌體成分的存在。但是目前的這些標(biāo)志物蛋白只是會(huì)在外泌體里富集，而并不是外泌體所有的，諸如CD63、ALIX等在細(xì)胞中都有，在一些細(xì)胞碎片、溶酶體、胞內(nèi)體中也大量存在。因此，WB僅能證實(shí)外泌體成分的存在，無(wú)法確認(rèn)外泌體的數(shù)量和完整性。
因此，通過(guò)三個(gè)實(shí)驗(yàn)的相互佐證來(lái)確認(rèn)外泌體的存在、數(shù)量和完整性。當(dāng)且僅當(dāng)三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都正常（即電鏡看到經(jīng)典結(jié)構(gòu)，WB檢測(cè)到外泌體標(biāo)志物的富集，NTA測(cè)算直徑分布符合外泌體定義），才能確認(rèn)研究者成功的分離純化了外泌體，基于這一成功的分離方法所得到的后續(xù)研究結(jié)果才能認(rèn)為是外泌體相關(guān)的研究結(jié)果。其實(shí)，好的鑒定方法應(yīng)當(dāng)是免疫電鏡結(jié)合NTA，但是免疫電鏡的難度過(guò)高，因此最終形成了電鏡、NTA和WB三個(gè)實(shí)驗(yàn)鑒定外泌體的主流共識(shí)。