詳細(xì)介紹
品牌:ZCIBIO
產(chǎn)品名稱:小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA試劑盒
應(yīng)用領(lǐng)域:小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA試劑盒僅供科研實驗,不得用于臨床診斷,使用前請認(rèn)真閱讀說明書
實驗樣本:血清、血漿、細(xì)胞上清液、組織等其他相關(guān)生物樣本
產(chǎn)品規(guī)格:48T(次)/96T(次)
保存條件:2~8℃,有效期6個月。
ELISA 實驗通常以細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿以及組織裂解物等為樣品。該實驗三種試劑:固相的抗原或抗體;酶標(biāo)記的抗原或抗體;酶作用的底物。根據(jù)樣品的性質(zhì)、檢測的實驗條件、試劑的來源,可設(shè)計出不同類型的ELISA檢測方法。
一、直接ELISA
原理:將抗原與固相載體連接,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加酶標(biāo)抗體進行孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。加底物反應(yīng)。直接法主要用于測定抗原。
優(yōu)點:操作流程簡短,實驗步驟少;無需使用二抗,避免了交叉反應(yīng);實驗步驟少,操作不易出錯。
缺點:實驗中的一抗需要直接用酶標(biāo)記,成本相對較高。
二、間接法ELISA
原理:將抗原與固相載體相連結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,加底物顯色。
優(yōu)點:酶標(biāo)二抗可加強信號,提高靈敏度;靈活性更大,同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗;不直標(biāo)一抗,可保留更多的免疫反應(yīng)性;成本更低,使用標(biāo)記抗體更少。
缺點:交叉反應(yīng)幾率升高。
三、雙抗夾心法ELISA
原理:雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子,但不適用于小分子抗原。將特異性抗體(捕獲抗體)與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品,保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體(檢測抗體)保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。
雙抗原夾心法測抗體的反應(yīng)模式與測抗原相似,用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測相應(yīng)的抗體。
優(yōu)點:高特異性,使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的;適用于復(fù)雜樣品,抗原不需要進行純化即可用于檢測;靈活性更大,靈敏度更高,可采用直接法也可采用間接法。
缺點:檢測物需要擁有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復(fù)表位;不適用于檢測小分子物質(zhì)。
四、競爭法ELISA
原理:競爭法ELISA最為復(fù)雜,通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有*抗體,當(dāng)樣品中的游離抗原越多,就可結(jié)合越多的抗體,而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物,只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據(jù)實驗設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。
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