色譜柱在使用前要進(jìn)行活化操作

　　色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。

　　色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。

　　色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對于同系物分析，只要500即可；對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。

　　液相色譜柱的活化操作，以常見的C18反相分析柱為例，出廠時(shí)一般都封裝有甲醇或乙腈等有機(jī)溶劑。隨著時(shí)間的推移，色譜柱內(nèi)的有機(jī)溶劑緩慢揮發(fā)，色譜柱內(nèi)可能出現(xiàn)氣泡。因此，新購買的色譜柱在使用前一般都要進(jìn)行活化操作。

　　下面以常見的4.6mmX150mm,5μm粒徑的C18反相分析柱為例：

　　1.在活化色譜柱前，應(yīng)先用相關(guān)試劑沖洗液相系統(tǒng)的流路，確保無污染物殘留。切換至封柱試劑（一般為甲醇或乙腈），置換流路內(nèi)的試劑。

　　2.停泵，將分析柱的進(jìn)液口連上系統(tǒng)，移除出液口的堵頭，出液口不連上系統(tǒng)。傾斜放置色譜柱，使其出液口高于入液口。

　　3.以0.1ml/min的流速沖洗色譜柱約5分鐘，切換至0.2ml/min的流速繼續(xù)沖洗。觀察色譜柱出液口，若連續(xù)出液，停泵，將色譜柱出液口接入液相系統(tǒng)。

　　4.以0.1ml/min的流速沖洗色譜柱，5分鐘內(nèi)將流速平穩(wěn)提升至0.5ml/min繼續(xù)沖洗色譜柱。

　　5.以0.5ml/min的流速沖洗色譜柱，期間觀察壓力與基線是否平穩(wěn)，直到?jīng)_洗的總流量達(dá)到30個(gè)柱體積。

　　6.活化完成。

　　對于久置不用的類似型號色譜柱，再次使用前也可參考上述步驟進(jìn)行活化。