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【系列三】IPHASE/匯智和源 體外藥代動力學研究熱點問題解答

閱讀:1015      發(fā)布時間:2023-7-17
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體外藥代動力學研究


—熱點問題—


第一題    體外PPB實驗的實驗方法如何選擇?


目前,常用于血漿蛋白結(jié)合率測定的方法主要包括平衡透析法(equilibrium dialysis, ED)、超濾法(ultrafiltration, UF)和超速離心法(ultracentrifugation, UC)。但是,具體選用哪種方法需綜合化合物的物理性質(zhì)、化學性質(zhì)和個人經(jīng)驗等。一般來說,ED可用于親水性藥物和高PPB藥物(85-100%);UF可用于不穩(wěn)定、高度親水的藥物,具有中等至低PPB(<85%);UC可用于疏水性化合物的PPB研究。


第二題    體外PPB實驗的緩沖液如何選擇?


PPB實驗中常用的緩沖液是 pH為7.4的磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液。對于某些化合物,由于不溶性鹽的形式或與蛋白質(zhì)上藥物的結(jié)合位點之間的相互作用等原因,可能需要用到其他的緩沖液。


第三題    使用平衡透析法進行血漿蛋白結(jié)合實驗時,應該如何選擇適宜孔徑大小的透析膜?


血漿中與藥物結(jié)合的蛋白主要有白蛋白(Albumin,65KDa)、脂蛋白(Lipoprotein,200~3400 KDa)、a1-酸性糖蛋白(Alpha acid glucoprotein,44KDa)。白蛋白是血漿中含量最高的蛋白,占血漿蛋白總量的60%,是主要的藥物結(jié)合蛋白,華法林即是與白蛋白結(jié)合的典型代表。透析膜孔徑選擇的原則是截留分子MW的一半,需達到90%以上的截留,且是透過分子MW的兩倍。


第四題    平衡透析法中二氧化碳是必須的嗎?


體內(nèi)血液(或血漿)的生理pH值范圍是7.2~7.6,血液一旦從動物體內(nèi)取出,血液中的二氧化碳便會逸出,導致pH的升高,從而影響化合物血漿蛋白結(jié)合的性質(zhì)和程度。為了避免pH的變化,建議在實驗之前使用少量高濃度磷酸將血漿pH調(diào)整至7.4或在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行孵育培養(yǎng)。


第五題    在平衡透析法中,是否需要設置緩沖液組,考察藥物是否在設定時間內(nèi)達到平衡?


建議設置該對照組,一方面可以考察這個藥物會不會在特定時間內(nèi)達到平衡,另一方面也可以評估藥物在緩沖液中是否穩(wěn)定。


第六題    PPB實驗要做幾個種屬?


原則上除人外,至少還需要選取毒理研究的動物種屬,如果藥效和毒理的種屬不同,也需要加上。


第七題    PPB實驗的濃度如何設計?


一般應包括正式PK實驗中的代表性有效濃度,高濃度建議接近或超過PK最高劑量的Cmax,建議幾個種屬設置相同濃度,也可以依據(jù)種屬PK差異設置不同濃度,一般至少10倍的測定范圍。


第八題    非特異性吸附高怎么辦?


使用表面活性劑預清洗UF裝置可以很好地減少濾膜引起的非特異性吸附(NSB)。堿性化合物可使用5%苯扎氯銨,中性和酸性化合物可使用0.5~5%吐溫80。為了對藥物與超濾裝置之間的NSB進行校正,可以將已知量的藥物溶于血漿水(超濾后的空白血漿)并進行超濾,非特異性吸附的校正因子,即超濾前初始血漿中的藥物濃度與超濾后血漿水中的藥物濃度之間的比率。


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