體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)在化合物遺傳毒性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用日益廣泛。ICH S2(R1) 已將肝臟彗星試驗(yàn)列為第 2 個(gè)組織/終點(diǎn)的體內(nèi)試驗(yàn)；體內(nèi)哺乳動(dòng)物堿性彗星試驗(yàn)的指導(dǎo)原則（TG489）也已頒布。體內(nèi)堿性彗星實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè) DNA 鏈斷裂、堿性不穩(wěn)定位點(diǎn)、不完整切除修復(fù)引起的 DNA 鏈的斷裂，能夠制成合適細(xì)胞懸液的組織 DNA 損傷。與其他試驗(yàn)相比其檢測(cè)的是單細(xì)胞水平的 DNA 損傷，因此該試驗(yàn)敏感性較高，操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)省時(shí)。
一、彗星試驗(yàn)原理
彗星試驗(yàn)（Comet Assay），亦稱單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)，是一種通過檢測(cè)DNA鏈損傷判斷遺傳毒性的技術(shù)。它能有效地檢測(cè)并定量分析細(xì)胞中DNA單、雙鏈缺口損傷的程度。當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性DNA損傷因子誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時(shí)，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴(kuò)散到細(xì)胞裂解液中，而核DNA由于相對(duì)分子質(zhì)量太大只能留在原位。
在中性條件下，DNA片段可進(jìn)入凝膠發(fā)生遷移，而在堿性電解質(zhì)的作用下，DNA發(fā)生解螺旋，損傷的DNA斷鏈及片段被釋放出來。由于這些DNA的相對(duì)分子質(zhì)量小且堿變性為單鏈，所以在電泳過程中帶負(fù)電荷的DNA會(huì)離開核DNA向正極遷移，從而形成彗星狀圖像，而未受損傷的DNA部分則保持球形。因此，可根據(jù)電泳緩沖液PH值不同，進(jìn)一步分為中性彗星試驗(yàn)（PH=8.4）和堿性彗星試驗(yàn)（PH>13），前者主要用于檢測(cè)DNA雙鏈的斷裂損傷，后者則具有更高的靈敏性，可用于檢測(cè)更少量的單鏈和雙鏈的斷裂損傷。
通常，DNA受損越嚴(yán)重，其產(chǎn)生的斷鏈和斷片就越多，長(zhǎng)度也越小，在相同電泳條件下遷移的DNA量就越多，遷移距離也越長(zhǎng)。因此，可通過測(cè)定DNA遷移部分的光密度或長(zhǎng)度來判定單個(gè)細(xì)胞的DNA損傷程度，從而確定受試物的作用劑量與DNA損傷效應(yīng)的關(guān)系。
陰性對(duì)照
陽性對(duì)照
二、IPHASE產(chǎn)品
IPHASE作為體外研究生物試劑引·領(lǐng)者，針對(duì)堿性彗星試驗(yàn)成功開發(fā)彗星試驗(yàn)試劑盒及其相應(yīng)載玻片，省去了客戶溶液配制時(shí)間，大大縮短了試驗(yàn)周期，且試劑盒各組分均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)和多次試驗(yàn)驗(yàn)證，符合堿性彗星試驗(yàn)要求。
產(chǎn)品名稱 規(guī)格
彗星試驗(yàn)試劑盒 20/50 Test
彗星試驗(yàn)載玻片，2孔 2/25 張
便捷性
提供單細(xì)胞凝膠電泳所需試劑和耗材，可以直接使用，大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期。
準(zhǔn)確性
試劑盒各成分均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性高。
穩(wěn)定性
本試劑盒穩(wěn)定性強(qiáng)、易于運(yùn)輸和保存。
應(yīng)用廣
應(yīng)用范圍廣，可用于食品、化學(xué)品、農(nóng)藥、消毒劑、食品添加劑、化妝品、醫(yī)療器械等多個(gè)方面的遺傳毒理學(xué)檢測(cè)。
IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的高·端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品。此外，IPHASE/匯智和源可提供特殊產(chǎn)品的定制服務(wù)，望廣大科研工作者咨詢。
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