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第一題    對于OATP1B1和1B3，采用共孵育也可以達(dá)到要求，是否還需要預(yù)孵育？

答：可以。由于OATP1B1和1B3抑制劑存在時(shí)間依賴效應(yīng)，需要與轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞預(yù)孵育后再加入底物。這樣抑制效應(yīng)會更明顯。

第二題    SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞在藥物作用前去掉培養(yǎng)液后，是否需要用反應(yīng)緩沖液預(yù)孵育幾分鐘？

答：需要加入反應(yīng)緩沖液預(yù)孵育五分鐘使細(xì)胞適應(yīng)新的緩沖體系。

第三題    SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞藥物作用終止后，用乙腈、甲醇等有機(jī)溶劑或反復(fù)凍融方法是否都可以裂解細(xì)胞？

答：都可以。若乙腈、甲醇等有機(jī)溶劑影響后續(xù)檢測可采用反復(fù)凍融方法。

第四題    高通透性的化合物為什么不需要預(yù)孵育？透膜的能力是否和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合能力一致？

答：高通透性的化合物是通過自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞，預(yù)孵育可能使化合物不經(jīng)過轉(zhuǎn)運(yùn)體就進(jìn)入細(xì)胞了。其透膜的能力是和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合的能力不一樣。

第五題    瞬轉(zhuǎn)SLC細(xì)胞在液氮凍存，時(shí)間久了是否會影響蛋白活性？

答：理論上液氮凍存時(shí)間久了不會影響蛋白活性。但對于不同批次的轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞需要穩(wěn)定性檢測進(jìn)行評判。

第六題    囊泡的結(jié)果如何評判？

答：ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體需要ATP水解提供轉(zhuǎn)運(yùn)所需能量，可設(shè)ATP處理組和AMP處理組，對比兩組囊泡對底物的轉(zhuǎn)運(yùn)效果。

第七題    ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體和SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體是否對化學(xué)藥物分子大小、水溶性或脂溶性有選擇性？抗體藥或放射性標(biāo)記的藥物是否具有選擇性？

答：ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體和SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體對化學(xué)藥物分子大小、水溶性或脂溶性是有選擇性?？贵w藥一般不經(jīng)過轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)。

第八題    在運(yùn)用SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞的時(shí)候，為什么最高濃度藥物的攝取率比次高濃度藥物的攝取率突然增加幾十倍？

答：藥物可能與SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞膜存在非特異性結(jié)合，藥物與SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞孵育后洗滌不充分，最高濃度藥物組在細(xì)胞膜上殘留更多，導(dǎo)致最高濃度藥物的攝取率比次高濃度藥物的攝取率突然增加的假象。

第九題    ABC囊泡試驗(yàn)AMP組底物攝取比ATP組高是何原因？

答：可能是底物與囊泡反應(yīng)終止后ATP組底物從囊泡腔內(nèi)流回緩沖液。囊泡懸液轉(zhuǎn)移到過濾裝置必須迅速，并且必須遵循一致的時(shí)間軸，以實(shí)現(xiàn)低標(biāo)準(zhǔn)差和數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。

第十題    ABC用Caco2體系需要考慮回收率，有化合物預(yù)試與Transwell膜沒有吸附，化合物溶解度也可以，在細(xì)胞中也是穩(wěn)定的，最后回收率還是偏低，還有哪些因素導(dǎo)致？

答：該化合物可能不僅僅是一種轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物。這種情況需要通過特定ABC或SLC的轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證。

十一題    地高-辛的在MDCK-MDR1中的ER一般在什么范圍內(nèi)？范圍在200左右可以通過哪些條件進(jìn)行調(diào)整？

答：有文獻(xiàn)報(bào)道地高-辛在MDCK-MDR1中的ER值為67（第十三次臨床藥理大會論文匯編，黎玉華，P88-P96。需要考慮細(xì)胞的生長狀態(tài)，單層細(xì)胞跨膜電阻、熒光黃在細(xì)胞單層中的表觀通透率等條件。

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