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高效液相色譜分析，如何避免堿性化合物的拖尾問題？

閱讀：4622 發(fā)布時間：2021-8-31

　　提起生物堿，制藥的小伙伴肯定不陌生，它是中草藥中最重要也*有價值的生物活性成分之一。生物堿可分為59種，它們的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，用傳統(tǒng)的方法分離效果不佳。高效液相色譜法還沒出現(xiàn)之前，對于生物堿的分離純化一直是學(xué)者們的難題。但是，即使使用液相色譜法分離，也會存在許多問題。堿性化合物分析中顯著的難題是峰形拖尾，而且堿性越強(qiáng)的時候，就越容易發(fā)生拖尾現(xiàn)象。

恒譜生和你一起探討一下峰拖尾該如何避免！

　　1、流動相

　　調(diào)節(jié)流動相也可以改善峰拖尾的現(xiàn)象，前期在選擇流動相的時候，要考慮流動相pH值的范圍。對堿性化合物來說，流動相的pH值對峰形會有較大影響，并且對保留因子和選擇性也有很大影響。恒譜生建議如果要分離堿性化合物，最好選擇pH值≤2.5，這樣會有比較好的峰形。恒譜生液相色譜柱的ph穩(wěn)定值在1.5-11不等，適合各種需求、各種分離模式的液相分析。

2、固定相

　　C18色譜柱是反相色譜分析中經(jīng)常使用到的色譜柱。但是十八烷基碳鏈很長，鍵合的時候空間位阻非常大，導(dǎo)致鍵合率不高，這樣，便會殘留大量未被鍵合的硅羥基。硅羥基在一些反相流動相中，容易解離。由于游離的硅羥基與解離后堿性化合產(chǎn)生的二級作用，導(dǎo)致了堿性化合物峰行出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。因此分析堿性化合物時，選擇硅羥基活性小的鍵合相是獲得良好峰形的關(guān)鍵。對于固定相的選擇最好采用99.99%純度以上的超純硅膠，金屬殘留量較低低，使得鍵合率增加，游離的硅羥基減少。

　　恒譜生液相色譜柱都采用高純度的硅膠基質(zhì)填料，其中USHB C18-BIO專為各種堿性化合物的分離而設(shè)計，pH值的耐受范圍為1.5-10，金屬雜質(zhì)極低，采取二次封尾的技術(shù)。這樣做主要是為了進(jìn)一步降低硅羥基的活性使得分析時可以獲得良好峰形。

　　今天只是討論了一小部分改善峰形拖尾的解決方式，影響堿性物質(zhì)峰拖尾的因素不僅僅只有這些，除了以上這些解決手段還可以采取使用三乙胺或者二乙胺這種掃尾劑改善峰形，使用離子對試劑也能夠起到增強(qiáng)堿性化合物的保留，解決峰形拖尾的問題等等。

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