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艾偉拓（上海）醫(yī)藥科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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HEPES作為IVT反應(yīng)buffer的相關(guān)研究

時(shí)間：2023/9/12閱讀：1030
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mRNA原液中采用HEPES作為buffer可能與前一步RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)。

早在1987年便有研究報(bào)道使用HEPES緩沖對(duì)用于體外轉(zhuǎn)錄，在該研究中考察了不同反應(yīng)條件下IHNV（感染性造血壞死病毒）的 RNA 聚合酶的體外轉(zhuǎn)錄，研究結(jié)果表明對(duì)比Tris，使用HEPES緩沖液可以最大限度地提高體外轉(zhuǎn)錄（IVT）效率。


研究中對(duì)緩沖條件的研究表明，HEPES緩沖液刺激的RNA合成量比Tris緩沖液高三倍（圖1 a），最佳濃度的HEPES緩沖液為400mM。
英國(guó)帝國(guó)理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院傳染病系系主任Robin Shattock是mRNA預(yù)防性疫苗領(lǐng)域的專家，與BioNTech以及PNI等公司都有較為密切的合作。其團(tuán)隊(duì)2021年發(fā)表關(guān)于saRNA體外轉(zhuǎn)錄體系優(yōu)化的文章中，考察篩選了影響saRNA體外轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵影響因素，最終確定了采用40mM濃度的HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer，具有更優(yōu)的體外轉(zhuǎn)錄效果。

2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液，用于進(jìn)一步制備RNA-LPX。

HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer具有優(yōu)勢(shì)，這是我們結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，推斷BioNTech采用HEPES緩沖對(duì)作為mRNA原液buffer的原因。

艾偉拓長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)注射級(jí)海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保護(hù)劑與緩沖鹽，GMP條件生產(chǎn)，中美雙報(bào)，供注射用，超低內(nèi)毒素，DNase& RNase free，符合國(guó)際主流藥典標(biāo)準(zhǔn)，助力重組蛋白疫苗、mRNA疫苗、腺病毒載體疫苗、脂質(zhì)體、單雙抗、抗體偶聯(lián)藥物等生物制劑生產(chǎn)與中外申報(bào)！


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