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電泳儀的毛細(xì)管柱制備方法介紹

閱讀：1698 發(fā)布時間：2022-11-26

　　毛細(xì)管凝膠電泳儀將凝膠電泳儀對生物大分子的分離能力與毛細(xì)管電泳儀的快速、微量和定量分析相結(jié)合，是當(dāng)今分離度高的一種分離技術(shù)。將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管中交聯(lián)生成凝膠，以凝膠作為載體進行電泳，凝膠具有多孔性，類似分子篩的作用，樣品分子按大小分離。

　　電泳儀的毛細(xì)管柱制備方法如下：

　　1.檢測窗口制備：

　　毛細(xì)管的聚酰亞胺涂層不透明，檢測窗口部位的聚酰亞胺必須剝離除去，剝離長度為2-3mm。常用剝離方法有硫酸腐蝕法、灼燒法和刀片刮除法。

　　2.毛細(xì)管內(nèi)壁修飾：

　　用120℃熱空氣吹，然后用室溫氨氣沖洗2h，再用50%3－甲基丙烯酰氧丙基－三甲氧基硅烷充滿12h，后用甲醇和水沖洗。

　　3.緩沖溶液制備：

　　將1.1g Tris和0.01g EDTA溶于100mlL 7M尿素溶液中，用NaH2PO4調(diào)至pH=8.6。

　　4.單體溶液制備：

　　將29g丙烯酰胺和1g N－甲叉雙丙烯酰胺溶解在100mlL緩沖溶液中。

　　5.催化劑制備：

　　將0.2g過硫酸銨溶于2mL緩沖溶液中。

　　6.凝膠溶液制備：

　　將10mlL單體溶液加入到30mlL緩沖溶液中，用4μL催化劑溶液和2.5μL四甲基乙二胺（TEMED）預(yù)聚合45min。

　　7.灌注聚合：

　　將上述凝膠溶液注入毛細(xì)管到無氣泡，將柱兩端浸入緩沖溶液中聚合數(shù)小時。

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