微生物侵入法，又稱微生物挑戰(zhàn)法，是一種較為常見的密封完整性測試方法，通常與模擬灌裝同時進(jìn)行。通過按照模擬灌裝驗(yàn)證方案進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝，然后進(jìn)行壓塞軋蓋后，目檢合格，經(jīng)已驗(yàn)證的滅菌柜滅菌后，將容器密封面浸入到高濃度的菌液中，使樣品容器內(nèi)的培養(yǎng)基充分接觸封口內(nèi)表面，樣品的頸部及封口的外表面應(yīng)*浸泡在菌懸液中，浸泡一定時間后取出，定期培養(yǎng)后檢查是否有微生物侵入，以確定容器密封系統(tǒng)的完整性。同時，需要做陽性對照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促生長能力。  

一、 試驗(yàn)方法

將新鮮的銅綠假單胞菌（Pswudomonas aeruginosa）ATCC9027的菌懸液倒入不銹鋼桶中。

1將50個經(jīng)滅菌的試樣編號，*侵入菌懸液中，同時將袋平放，使袋內(nèi)的無菌培養(yǎng)基充分接觸焊接部位的內(nèi)表面，試樣容器在菌懸液中持續(xù)浸泡4小時。

2浸泡結(jié)束時再取一份菌懸液，用平板計數(shù)菌懸液的濃度。

3從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒容器外表面。

4取裝滿培養(yǎng)基樣品兩個，作陽性對照，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒，接種入10～100CFU銅綠假單胞菌，按步驟8.2進(jìn)行培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗(yàn)。

5將挑戰(zhàn)試驗(yàn)用的試樣培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內(nèi)培養(yǎng)基中微生物的生長情況。有生長記作+，無生長記作-。如果試樣容器長菌，按8.2方法確認(rèn)生長菌是挑戰(zhàn)微生物——銅綠假單胞菌；如果所有試樣容器都不長菌，則取10個試樣按8.2進(jìn)行培養(yǎng)基的營養(yǎng)性試驗(yàn)。
6試驗(yàn)結(jié)束后，挑戰(zhàn)試驗(yàn)用菌懸液經(jīng)121℃30分鐘滅菌后丟棄。

二、判斷標(biāo)準(zhǔn)

1步驟2、步驟4、5中進(jìn)行的營養(yǎng)性試驗(yàn)都合格，試樣的挑戰(zhàn)試驗(yàn)才有效。

2在挑戰(zhàn)試驗(yàn)開始時，挑戰(zhàn)用菌懸液濃度（活菌數(shù)）必須達(dá)到1×106CFU/ml。

3挑戰(zhàn)試驗(yàn)中如長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)，并按下述要求作進(jìn)一步調(diào)查。

4仔細(xì)檢查容器各部位封口處是否有缺損，造成微生物浸入。

5將觀察到試樣容器封口的缺陷，采用拍照詳細(xì)記錄。

6如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，試驗(yàn)作失敗論處。

     微生物侵入法密封完整性試驗(yàn)除了需要準(zhǔn)備菌液外，還需要借助試驗(yàn)設(shè)備來完成。濟(jì)南瑞萊鉑智能科技研發(fā)生產(chǎn)的微生物侵入密封性泄漏實(shí)驗(yàn)儀ZYY-08A就是一款適用于微生物侵入法密封完整性試驗(yàn)的檢測儀器，儀器操作簡單方便，測試精度高。而且儀器自帶微型打印機(jī)，可打印設(shè)備序號、樣品批號、實(shí)驗(yàn)人員、測試結(jié)果、檢測時間等完整試驗(yàn)信息。