Zeta Life 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)分享2024新

 

為了轉(zhuǎn)染raw 264.7小鼠巨噬單核細(xì)胞我們實(shí)驗(yàn)室嘗試了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它轉(zhuǎn)染試劑，對(duì)于我們8000bp的質(zhì)粒DNA基本轉(zhuǎn)染后都沒有熒光信號(hào)；師兄在中山大學(xué)的同學(xué)給我們推薦了他們實(shí)驗(yàn)室用Zeta Life Advanced DNA RNA貨號(hào)AD600050轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)分享。

按照中山大學(xué)師兄給出的方法并結(jié)合我實(shí)驗(yàn)室情況我把自己在6孔板轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)整理如下，希望對(duì)你轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞有一定的幫助，下面是我*用轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞的熒光和細(xì)胞明場(chǎng)圖片，后期進(jìn)一步優(yōu)化后的新圖片我也會(huì)隨后呈上：
一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞匯合度在70%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號(hào)AD600050轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無(wú)血清的培養(yǎng)基里面，我后期會(huì)進(jìn)一步摸索此條件）。

4、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率

三、Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：

四、注意事項(xiàng)：

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等轉(zhuǎn)染試劑；

2細(xì)胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;