以下是基因編輯轉(zhuǎn)染試劑盒的一般操作指南：
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
細(xì)胞培養(yǎng)：選擇合適的細(xì)胞株，用相應(yīng)的培養(yǎng)基在適宜條件（如37℃、5%CO?培養(yǎng)箱）下培養(yǎng)。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70%-80%融合度時(shí)，可用于轉(zhuǎn)染。
試劑與材料準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求準(zhǔn)備好基因編輯轉(zhuǎn)染試劑盒、要轉(zhuǎn)染的DNA或RNA、無(wú)血清培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿等。檢查試劑盒中各組分是否齊全，有無(wú)變質(zhì)、沉淀等異常情況。
DNA或RNA準(zhǔn)備：使用相應(yīng)試劑盒提取或合成目的DNA或RNA。通過(guò)納米滴光度計(jì)測(cè)定其濃度和純度，確保濃度合適，且DNA或RNA無(wú)蛋白質(zhì)、RNA和其他化學(xué)物質(zhì)污染。
轉(zhuǎn)染操作
轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備
在無(wú)菌離心管中，加入適量無(wú)血清培養(yǎng)基，再加入一定量的轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。
在另一無(wú)菌離心管中，用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量的DNA或RNA。
將稀釋后的DNA或RNA加入到含有轉(zhuǎn)染試劑的離心管中，輕輕混勻，室溫下孵育15-30分鐘，使轉(zhuǎn)染試劑與DNA或RNA形成穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染復(fù)合物。
轉(zhuǎn)染前細(xì)胞準(zhǔn)備：轉(zhuǎn)染復(fù)合物孵育期間，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。對(duì)于貼壁細(xì)胞，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化，離心收集細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至合適濃度；對(duì)于懸浮細(xì)胞，直接離心收集細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸并調(diào)整細(xì)胞密度。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：將制備好的轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含有細(xì)胞的培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，輕輕搖勻或晃動(dòng)，使轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻分布在細(xì)胞周圍。然后將培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中，按照細(xì)胞培養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)染后處理
培養(yǎng)條件調(diào)整：轉(zhuǎn)染后4-6小時(shí)，檢查細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞狀態(tài)良好，可更換為含有血清的培養(yǎng)基，為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)細(xì)胞恢復(fù)和生長(zhǎng)。
觀察與檢測(cè)
細(xì)胞形態(tài)觀察：轉(zhuǎn)染后24小時(shí)內(nèi)，使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞，記錄細(xì)胞形態(tài)變化，注意是否有細(xì)胞脫落、聚集等異常情況。
轉(zhuǎn)染效率評(píng)估：根據(jù)轉(zhuǎn)染的基因是否帶有熒光標(biāo)記等，在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)，使用熒光顯微鏡觀察并計(jì)算熒光陽(yáng)性細(xì)胞的比例；或通過(guò)流式細(xì)胞儀分析熒光信號(hào)，確定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的比例；也可在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)提取總RNA或總蛋白，通過(guò)PCR、WesternBlot等方法檢測(cè)目的基因的表達(dá)情況。
在操作過(guò)程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免微生物污染。同時(shí)，不同品牌和型號(hào)的基因編輯轉(zhuǎn)染試劑盒可能在具體操作步驟和要求上存在差異，務(wù)必詳細(xì)閱讀試劑盒的說(shuō)明書(shū)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。
會(huì)員.png)
6
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)