軟瓊脂克隆形成服務(wù)實(shí)驗(yàn)步驟

1.獲取樣本，培養(yǎng)細(xì)胞，

2.調(diào)整細(xì)胞懸液密度為1x103個(gè)/ml細(xì)胞。

3.制備底層瓊脂，溶化的5%瓊脂和 37℃ 左右預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液以1:9比例在 40℃ 均勻混合，加入培養(yǎng)皿(直

徑 60mm)中，每皿含0.5%瓊脂培養(yǎng)基2ml，室溫下瓊脂凝固。

4.制備上層瓊脂 37℃ 密度每川含200個(gè)的細(xì)胞懸液1.5ml移入小燒杯中，加入 40℃、5%瓊脂等體積混勻，即成0.25%半固體瓊脂培養(yǎng)基。配好的半固體瓊脂培養(yǎng)其立即加入鋪有底層瓊脂的培養(yǎng)用中，率溫下瓊脂凝固。37℃，5%CO2靜罟培養(yǎng)2-3周。

5.當(dāng)培養(yǎng)血中出現(xiàn)肉眼可見克降時(shí)，終止培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液，PBS液小心浸洗2次，空氣干燥，甲醇固定15分鐘，棄甲醇空氣干燥，用Giemsa染液染色10分鐘，流水緩慍洗去邊液，空氣干燥。

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