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安諾倫(北京)生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2020-05-14 14:51:32瀏覽次數(shù):1738次

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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

 

其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái)。目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,beads上的prorein A就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

 

基本流程是:細(xì)胞裂解液中加入抗體,與抗原形成特異免疫復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗脫,收集免疫復(fù)合物,然后進(jìn)行SDS-PAGE及Western blotting分析。

 

服務(wù)流程

1.        構(gòu)建含有目的基因的表達(dá)質(zhì)粒

2.        共轉(zhuǎn)細(xì)胞

3.        裂解細(xì)胞并加入誘餌蛋白的抗體,孵育

4.        加入protein A或G以與抗體特異性結(jié)合于Agarose珠

5.        SDS-PAGE; Western Blot

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