前一階段花費(fèi)了不少時(shí)間，來(lái)摸索體外BBB的構(gòu)建方法，試了三種Transwell板，試用了2-3臺(tái)細(xì)胞電阻儀，也換了不同課題組的細(xì)胞，功夫不負(fù)有心人，終于構(gòu)建成功拿到了理想結(jié)果。 當(dāng)初在摸索階段從小紅書上也獲得很多靈感，也感激給予幫助不吝賜教的朋友們，因此借總結(jié)一些經(jīng)驗(yàn)，分享出來(lái)，希望友友們少走彎路。
1、細(xì)胞狀態(tài)很重要！一定要等到細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)再種板，上室小孔膜上鋪5W個(gè)細(xì)胞，種板要均勻，上室100-200μL完培，下室600-800μL完培。
2、不要污染！由于種Transwell板比較復(fù)雜，工序多，要時(shí)刻注意消毒。種完板后，不用一直鏡下觀察；使用電阻儀檢測(cè)室，更要注意不要污染。
3、 選擇合適的Transwell板，確定自己需要多少孔的孔板，從而知道種多少個(gè)細(xì)胞。如果需要鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)的話，要用PET膜（透明的）。我當(dāng)初試了甄選/康寧/潔特的，最后選了潔特的孔板。
4、選擇穩(wěn)定好用的細(xì)胞電阻儀?。?！這個(gè)是重中之重，比如密理博的電阻儀，是筷子電極，手持式的話容易抖，導(dǎo)致數(shù)值不穩(wěn)。我選的是北京金工的RE1600上皮電壓電阻儀，可以平穩(wěn)放在孔板上，檢測(cè)的時(shí)候數(shù)值超級(jí)穩(wěn)定。
5、關(guān)于BBB形成時(shí)間，每次構(gòu)建BBB的時(shí)長(zhǎng)都要根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)而異，要確保單層細(xì)胞形成（細(xì)胞電阻達(dá)到穩(wěn)定平臺(tái)期），再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
文章引用出處：體外血腦屏障模型構(gòu)建-大功已成 - 小紅書 (xiaohongshu.com)
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