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如何切出理想的石蠟切片
如何切出理想的石蠟切片
石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中應(yīng)用廣泛的方法。但在石蠟切片過程中，經(jīng)常會遇到一些問題：修整蠟塊總修不平整？切片時容易碎片、翻卷？攤片時總是鋪不平整？
1.正確固定
· 組織離體后，必須在1小時內(nèi)固定。
· 固定液須是組織體積的4-10倍，濃度準(zhǔn)確，過稀或過濃都會影響組織形態(tài)和固定效果。如發(fā)現(xiàn)固定液變質(zhì)，如甲醛液體產(chǎn)生白色沉淀，應(yīng)立即更換。
· 固定溫度宜室溫或放于35-37℃的全封閉組織處理機(jī)內(nèi)，溫度過高，會加快組織自溶和過度收縮，破壞細(xì)胞內(nèi)的抗原和DNA。
· 固定時間不超過40小時，根據(jù)室溫和標(biāo)本不同而調(diào)整。
2.恰當(dāng)脫水
脫水的關(guān)鍵是使低濃度的酒精脫水時間和高濃度酒精脫水時間正確搭配。低濃度酒精可以使組織收縮減少，更好切；高濃度酒精使組織脫水更*。
一般情況下，標(biāo)本脫水時間（35℃）為：75%酒精1.5小時、85%酒精2小時、95%酒精（2次）各1.5至2小時、純酒精（2次）各1.5至2小時。小標(biāo)本脫水時間與大標(biāo)本差異不大，一般沒必要分開（小標(biāo)本發(fā)脆往往是紙包太厚或相互粘在一起，組織脫水不*引起的。如果時間緊急，也可適當(dāng)縮短脫水時間，脫水時間長短，與室溫高低密切相關(guān)，同時也與組織的厚薄、組織類型、組織固定的程度等條件有關(guān)）。
脫水是否*，直接關(guān)系到組織是否能充分透明。如果脫水時加溫過高（超過50℃），或使用丙酮等，容易導(dǎo)致組織收縮過度和組織發(fā)硬發(fā)脆。組織脫水引起的組織發(fā)脆有三種原因：
· 組織固定不佳，酒精起到固定作用，從而引起組織質(zhì)地發(fā)生改變。
· 組織本身質(zhì)地因素，如小動物肝臟，在切片時溫度過低導(dǎo)致。
· 假脆，由于脫水不足，組織在浸蠟時，蠟無法滲透到組織中去，組織在高溫下“干烤”導(dǎo)致發(fā)硬發(fā)脆，切片會出現(xiàn)粉粉的或一絲絲的現(xiàn)象，子宮肌瘤等較硬的組織還會有一棱棱的現(xiàn)象，甚至?xí)麎K往外崩；嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟，甚至還會有水。
3.石蠟切片操作要點(diǎn)
· 切片前，把切片機(jī)上相關(guān)鎖桿或螺旋擰緊，否則可能出現(xiàn)跳片、切片厚薄不均現(xiàn)象。
· 刮凈包埋盒周邊的余蠟，否則樣品夾持可能松動，影響切片質(zhì)量。
· 正確修塊，先粗修，厚度大約在15-30微米，質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些。粗修至組織全部暴露后，再進(jìn)行細(xì)修。
· 選擇蠟塊冷凍方式，冰盒優(yōu)于冷凍臺。使用冰盒能加水潤濕蠟塊，冷凍速度快，體積小，使用成本低，無須外接電源。
· 切片時輕握手輪，用力均勻輕柔，搖速不宜過快或過慢。過快會導(dǎo)致切片厚薄不均，切片難以展開；過慢會使切片增厚。切片要求完整、薄、均勻。
在切片后，先把切片放入冷水，再移至熱水，這樣片子會較薄，皺褶和氣泡也少。展片水溫應(yīng)在42-55℃之間，這和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān)。水溫過高，會引起組織細(xì)胞散開，水溫過低，切片皺褶無法攤平。