化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
超純RNA提取試劑盒(DNase I)操作步驟
閱讀：1627 發(fā)布時間：2022-6-8超純RNA提取試劑盒(DNase I)操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA Kit，48T/96T
小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA Kit，48T/96T
大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL) ELISA Kit，48T/96T
人酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA Kit，48T/96T
小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA Kit，48T/96T
大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA Kit，48T/96T
犬α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
雞α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
貓α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
人α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
小鼠α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
猴α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
豬α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
兔子α干擾素(IFN-α)ELISA Kit，48T/96T
人堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)ELISA Kit，48T/96T
小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)ELISA Kit，48T/96T
大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)ELISA Kit，48T/96T
人堿性成纖維細(xì)胞生長因子6(bFGF-6)ELISA Kit，48T/96T
小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子6(bFGF-6)ELISA Kit，48T/96T
大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子6(bFGF-6)ELISA Kit，48T/96T
人堿性成纖維細(xì)胞生長因子9(bFGF-9)ELISA Kit，48T/96T
小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9(bFGF-9)ELISA Kit，48T/96T
大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9(bFGF-9)ELISA Kit，48T/96T
人纖連蛋白(FN)ELISA Kit，48T/96T
小鼠纖連蛋白(FN)ELISA Kit，48T/96T