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產品名稱：大鼠淋巴結淋巴細胞

組織來源：淋巴結

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞簡介：

大鼠淋巴結淋巴分離自淋巴結；淋巴結是哺乳類的周圍淋巴器官，由淋巴細胞集合而成。呈豆形，位于淋巴管行進途中，是產生免疫應答的重要器官之一。淋巴結表面包有被膜，被膜的結締組織伸入淋巴結內形成小梁，構成淋巴結的支架。被膜下為皮質區(qū)，淋巴結的中心及門部為髓質區(qū)。皮質區(qū)有淋巴小結、彌散淋巴組織和皮質淋巴竇（簡稱皮竇），髓質包括由致密淋巴組織構成的髓索和髓質淋巴竇（簡稱髓竇）。淋巴竇的竇腔內有許多淋巴細胞和巨噬細胞，從輸入淋巴管流來的淋巴液先進入皮竇再流向髓竇，最后經輸出淋巴管離開淋巴結。淋巴結的主要功能是濾過淋巴液，產生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應。淋巴結腫大或疼痛常表示其屬區(qū)范圍內的器官有炎癥或其他病變。主要功能是濾過淋巴液，產生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應；當局部感染時，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結腫大。如該淋巴結不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉移。淋巴結淋巴細胞是白細胞的一種，由次級淋巴器官淋巴結產生，是機體免疫應答功能的重要細胞成分；細胞為圓形細胞核，細胞質少。成熟淋巴細胞需依賴抗原刺激而分化增殖，繼而發(fā)揮其免疫功能。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠淋巴結淋巴采用分離淋巴結組織、研磨獲取單細胞懸液后通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為1×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠淋巴結淋巴經過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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