化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠腹膜間皮采用混合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠腹膜間皮經(jīng)PCK、Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠腹膜間皮采用混合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠腹膜間皮經(jīng)PCK、Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞傳代及凍存：
| 細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
| 如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
豬主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒 豬主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 豬主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒、豬主要組織相容性復合體Ⅰ類eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。
豬轉化生長因子β2試劑盒 豬轉化生長因子β2試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 豬轉化生長因子β2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬轉化生長因子β2試劑盒、豬轉化生長因子β2eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。
豬總試劑盒 豬總試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 豬總試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬總試劑盒、豬總eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。
豬組胺試劑盒 豬組胺試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 豬組胺試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬組胺試劑盒、豬組胺eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。
豬血小板活化因子(PAF)ELISA 試劑盒
Human activin A (Activin-A) ELISA Kit 人活化素A(Activin-A)試劑盒
RabbitApolipoproteinE,Apo-EELISAKit 兔載脂蛋白E(Apo-E)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforANX-V(MouseannexinV)ELISAKit小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ
血小板相關性抗體(PAIgG)細胞流式儀試劑盒10次
PorcineIerferonγ,IFN-γELISAKit豬γ干擾素(IFN-γ)試劑盒
Ras樣蛋白家族11A抗體
鋅指蛋白79抗體
CD22重組小鼠 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein
肌細胞生成素(MYOG)重組蛋白 Recombinant Myogenin (MYOG)
KEAP1重組人 KEAP1 / INRF2 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
BMPR1A Protein Human 重組人 BMPRIA / ALK-3 / CD292 蛋白 (His 標簽)
NTRK1 Protein Canine 重組狗 TrkA / NTRK1 蛋白 (His 標簽)
肌細胞生成素(MYOG)重組蛋白 Recombinant Myogenin (MYOG)
BMPR1A Protein Human 重組人 BMPRIA / ALK-3 / CD292 蛋白 (His 標簽)
CD22重組小鼠 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein
NTRK1 Protein Canine 重組狗 TrkA / NTRK1 蛋白 (His 標簽)
KEAP1重組人 KEAP1 / INRF2 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
小鼠腹膜間皮細胞大鼠過氧化物酶(GSH-PX)試劑盒 ，英文名： GSH-PX ELISA Kit
Rabbit ierleukin 3 (IL-3) ELISA Kit 兔子白介素3(IL-3)試劑盒
副溶血性弧菌(VP)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMIP-3Beta/ELC/CCL19ELISAKit大鼠巨噬細胞性蛋白3β
體液精(arginine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次
ELISAKitIL-2犬白介素2
原代細胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應將原代細胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；
4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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