化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
詳細(xì)介紹
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Coccidioides immitisPCR |
貨號 | YS30597-R |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
Myc tag antibody (FITC)原裝、分裝牛膽鹽Bile Salt (Bovine)
Myc tag antibody (FITC)原裝、分裝牛血清白蛋白Ⅴ（不含脂肪）
GAL4 antibody - ChIP Grade原裝、分裝Adenosine 腺苷
GABARAP antibody原裝、分裝Cytidine 胞苷(胞嘧啶核苷）
Syndecan-1 antibody [B-A38], prediluted原裝、分裝可溶性兩性B Amphotericin B
E Cadherin antibody [HECD-1]原裝、分裝Aprotinin 蛋白酶抑制（抑肽酶）
CD55 antibody [MEM-118]原裝、分裝Flavourzyme風(fēng)味蛋白酶
TRF1 antibody - ChIP Grade原裝、分裝復(fù)合蛋白酶Hsp60 antibody [EP1006Y] - Loading Control原裝、分裝位庚內(nèi)酯(Standard for GC ,>98.5%(GC))
Hsp60 antibody [EP1006Y] - Loading Control原裝、分裝(+)-葑(standard for GC, ≥99.5% (GC))
CD22 (phospho Y762) antibody [EP727Y]原裝、分裝(+)-葑(standard for GC, ≥99.5% (GC))
CD22 (phospho Y762) antibody [EP727Y]原裝、分裝二醇醚(Standard for GC,≥99.5%(GC))
CD22 (phospho Y762) antibody [EP727Y]原裝、分裝醇(GCS,>99.8%(GC))
Crk p38 antibody [EP242Y]原裝、分裝酯(Standard for GC,≥99.7%(GC))
Crk p38 antibody [EP242Y]原裝、分裝異苯(Standard for GC,>99.5%)
Crk p38 antibody [EP242Y]原裝、分裝異辛(Standard for GC,≥99.5%(GC))
Vitronectin/S-Protein antibody [EP873Y]原裝、分裝異酯(standard for GC,≥99.5%（GC）)
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書Recombinant mouse Noggin protein原裝、分裝肥大細(xì)胞脫粒肽HR-2
Recombinant mouse Noggin protein原裝、分裝黃蜂毒素
Recombinant human TIMP1 protein原裝、分裝黃蜂毒素7
Recombinant mouse CTF2 protein原裝、分裝黃蜂毒素 X
Recombinant mouse CTF2 protein原裝、分裝交配子aSK2
Aprotinin antibody [35]原裝、分裝乳性蛋白激酶底物
Citrate transport protein antibody原裝、分裝乳性蛋白（1-11），人
Recombinant human DKK1 protein原裝、分裝乳性蛋白（1-11），小鼠
Recombinant human DKK1 protein原裝、分裝乳性蛋白（1-17）
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。