化工儀器網(wǎng)
產品簡介
梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
詳細介紹
梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
產品名稱 | |
英文名稱 | Clostridium estertheticum PCR |
貨號 | YS30587-R |
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標本結果判定：
（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。
PCR實驗步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
下列是公司正在*的產品：
Hepatitis C Virus antibody原裝、分裝β-萘/2-萘/β-萘醋
Hepatitis C Virus antibody原裝、分裝固藍RR鹽/重氮堅牢藍/堅牢藍RR鹽
Hepatitis E Virus antibody原裝、分裝對基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷/PNPG
Hepatitis G Virus antibody原裝、分裝赤/赤GA3/赤霉/九二0
Adenovirus antibody原裝、分裝異玫瑰紅B/RBITC
p13 antibody [BM3]原裝、分裝羧基纖維素/羧基醚纖維素
Kappa light chain antibody [MEM-09]原裝、分裝3-吲哚/吲哚/生長素/IAA
Bovine Papilloma Virus E2 antibody [5H4]原裝、分裝馬血清/大鼠血清/胎牛血清等各種血清
Cellubrevin antibody原裝、分裝神經(jīng)(分析標準品,≥99.0%(GC))
beta Dystroglycan antibody原裝、分裝十五(分析標準品,≥99.5%(GC))
CIB1/KIP antibody原裝、分裝泛鈣一水合物(標準品)
Recombinant Toxoplasma gondii MIC 3 protein原裝、分裝山梨鉀(標準品)
Recombinant Toxoplasma gondii GRA 1 protein原裝、分裝全氟辛(分析標準品, 用于環(huán)境分析)
Recombinant EBV protein原裝、分裝正辛(分析標準品,≥99.9%(GC))
Recombinant EBV p23 protein原裝、分裝(標準品)
梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒FATP1 antibody原裝、分裝Kemptamide
Recombinant Human HMGB1 protein (Tagged-His Tag)原裝、分裝肯普肽
Recombinant VP16 protein原裝、分裝肯普肽負控制
Recombinant S. cerevisiae GAL4 protein原裝、分裝內酯抵抗肽MRFFV
Recombinant human STAT2 protein原裝、分裝角質3細胞生長子受體肽
Recombinant Human POLR2I protein原裝、分裝胰島素激酶結構域受體（1）
Recombinant Human Thyroid Hormone Receptor alpha 1 protein原裝、分裝胰島素激酶結構域受體（2）
Recombinant Human POLR2E/rpb5 protein原裝、分裝胰島素激酶結構域受體（3）
CGRP antibody [4901]原裝、分裝胰島素激酶結構域受體（4）