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產(chǎn)品簡介
卡薩諾爾森林病病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
詳細(xì)介紹
卡薩諾爾森林病病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Kyasanur Forest Disease Virus(KFDV)RTPCR |
貨號 | YS31003-R |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
HeLa nuclear extract lysate (2 hr serum response)原裝、分裝異煙
HeLa nuclear extract lysate (4 hr serum response)原裝、分裝異煙
HeLa nuclear extract lysate (TNF alpha stimulated)原裝、分裝異煙
HeLa nuclear extract lysate (TPA stimulated 2 hr)原裝、分裝異煙（標(biāo)準(zhǔn)品）
HeLa S3 nuclear extract lysate原裝、分裝噻托溴銨一水合物
HeLa nuclear extract lysate原裝、分裝噻托溴銨一水合物
HeLa whole cell lysate (IL1 alpha stimulated)原裝、分裝噻托溴銨一水合物
HeLa whole cell lysate (TNF alpha stimulated)原裝、分裝鹽胺
HepG2 cytoplasmic extract lysate原裝、分裝鹽胺Recombinant human PRKACG protein原裝、分裝DAPT (GSI-IX)
Recombinant X. laevis PKC alpha protein原裝、分裝DAPT (GSI-IX)
Recombinant human PKC beta 1 protein原裝、分裝赤芝E
Recombinant human PKC beta 2 protein原裝、分裝利克飛龍
Recombinant human PKC beta 2 protein原裝、分裝利克飛龍
Recombinant human PKC gamma protein原裝、分裝利克飛龍
GPR171 antibody原裝、分裝靈芝烯C
Recombinant human PKC delta protein原裝、分裝生物胞素
Recombinant human PKC delta protein原裝、分裝生物胞素
卡薩諾爾森林病病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格XTP4 antibody [EPR2678]原裝、分裝3,3',4,4'-二苯基砜四羧二酐(>97.0%(HPLC)(T))
XTP4 antibody [EPR2678]原裝、分裝二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺二鈉(>98.0%(HPLC)(T))
XTP4 antibody [EPR2678]原裝、分裝3,7-二氨基-2,8-二基二苯并噻吩砜(含2,6-二基異構(gòu)體)(>70.0%(HPLC))
BNP antibody [EPR3735]原裝、分裝2,2-雙(4-羥苯基)(>98.0%(GC))
BNP antibody [EPR3735]原裝、分裝2,2-雙(4-羥苯基)(>98.0%(GC))
BNP antibody [EPR3735]原裝、分裝2,2'-雙(4-氧苯基)(>98.0%(N))
FABP4 antibody [EPR3579]原裝、分裝2,2-雙(4-酰氧基苯基)(>98.0%(GC))
FABP4 antibody [EPR3579]原裝、分裝2,2-雙(4-氯酰氧苯基)(>97.0%(GC)(T))
FABP4 antibody [EPR3579]原裝、分裝2,2-雙(4-氯酰氧苯基)(>97.0%(GC)(T))
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。