詳細介紹
操作步驟:
1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
產(chǎn)品名稱 | MCP-3 elisa試劑盒 |
英文名稱 | Rat monocyte chemotactic protein 3, MCP-3 Elisa Kit |
規(guī)格 | 48T/96T |
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān),我司嚴格按照進行,已獲得國家承認的“三證",每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必擔(dān)心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等;
控制方法:采血時規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本;對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
具有如下優(yōu)點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
五、性價比非常好,節(jié)省實驗經(jīng)費。
advancedoxidationproteinproducts,AOPPELISAKit人晚期蛋白產(chǎn)物CAS:380929進口、國產(chǎn)規(guī)格:15mg
isletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit人胰島淀粉樣多肽CAS:8469進口、國產(chǎn)規(guī)格:200mg
glycosylatedserumprotein,GSPELISAKit人糖蛋白CAS:28486進口、國產(chǎn)規(guī)格:25mg
GlycatedAlbumin,GAELISAKit人糖白蛋白CAS:29586進口、國產(chǎn)規(guī)格:25mg
Thyroxine-BindingGlobulinAssay,TBGELISAKit人狀腺結(jié)合球蛋白CAS:939555進口、國產(chǎn)規(guī)格:25mg
advancedglycationendproducts,AGEsELISAKit人晚期糖基終末產(chǎn)物CAS:546439進口、國產(chǎn)規(guī)格:25mg
C-Polypeptide,CPELISAKit人C多肽CAS:7738719進口、國產(chǎn)規(guī)格:25mg
Receptorforadvancedglycationendproducts,RAGE/AGERELISAKit人晚期糖基終末產(chǎn)物受體CAS:1247509進口、國產(chǎn)規(guī)格:250mg
Glucagon,GCELISAKit人胰高血糖素CAS:753305進口、國產(chǎn)規(guī)格:125mg
PancreaticPolypeptide,PPELISAKit人胰多肽CAS:775179進口、國產(chǎn)規(guī)格:20mg
insulinautoantibodies,IAAELISAKit人胰島素自身抗體CAS:278334進口、國產(chǎn)規(guī)格:125mg
glutamicaciddecarboxylase,GADELISAKit人谷氨脫羧酶CAS:34546進口、國產(chǎn)規(guī)格:20mg
Thymopentin,TPELISAKit人胸腺五肽CAS:821867進口、國產(chǎn)規(guī)格:100mg
ThymosinELISAKit人胸腺肽CAS:進口、國產(chǎn)規(guī)格:25mg
Non-PhosphorylatedInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人未類胰島素生長子結(jié)合蛋白CAS:進口、國產(chǎn)規(guī)格:1ml
MCP-3 elisa試劑盒異橙皮內(nèi)酯DiI iodide [1,1‘-Dioctadecyl-3,3,3’,3‘- tetramethylindocarbocyanine iodide] VB12結(jié)合珠蛋白;觸珠蛋白檢測試盒
異莪術(shù)呋喃二DiI perchlorate [1,1’-Dioctadecyl-3,3,3‘,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate] LZM維生素B12檢測試盒
異戈米辛 ODiI triflate [1,1‘-Dioctadecyl-3,3,3’,3‘-tetramethylindocarbocyanine triflate] Beclin1溶菌酶檢測試盒
異漢防己素Nile Red LC3IIBeclin1檢測試盒
異姜花素DR 6 [Rhodamine B, hexyl ester, perchlorate] p62微管相關(guān)蛋白輕鏈3II檢測試盒
異柯楠TMRE [Tetramethylrhodamine ethyl ester] Lipasep62檢測試盒
測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。