詳細(xì)介紹
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀(guān)察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
產(chǎn)品名稱(chēng) | ALCAMElisaKit |
英文名稱(chēng) | Rat Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule, ALCAM Elisa Kit |
規(guī)格 | 48T/96T |
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行,已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào),只要客戶(hù)提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿(mǎn)足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類(lèi)風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等;
控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過(guò)久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
操作步驟:
1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
具有如下優(yōu)點(diǎn):
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;
五、性?xún)r(jià)比非常好,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
地孕英文名(EN):Isobutylmethacrylate,規(guī)格(SP):250ML
地孕(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):tertButylmethacrylate,98%規(guī)格(SP):25ML
鉑,吡鉑英文名(EN):DimethylTrisulfide,規(guī)格(SP):5G
芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):Bis(2methylfuryl)disulfide,98%規(guī)格(SP):1G
砜素英文名(EN):Allylmethacrylate,98%規(guī)格(SP):100ML
砜素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):DipropylDisulfide,規(guī)格(SP):25G
砜素甘鹽鹽英文名(EN):Glycidylmethacrylate,97.0%規(guī)格(SP):100G
睪;睪素英文名(EN):Methyl5methylisoxazolecarboxylate...規(guī)格(SP):5G
睪;睪素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):εCaprolactone,規(guī)格(SP):100G
鈷英文名(EN):Diallylmaleate,≥95.0%規(guī)格(SP):25ML
鈷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):2,2′(Dithiodimethylene)difuran,≥規(guī)格(SP):1G
隆標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%)英文名(EN):Bis[3(triethoxysilyl)propyl]tetrasul...規(guī)格(SP):5ML
司特英文名(EN):Hexamethylenediisocyanate,規(guī)格(SP):25ML
地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):Tetraethylthiuramdisulfide,≥97.0%規(guī)格(SP):25G
倍他司汀英文名(EN):Trimethylenesulfide規(guī)格(SP):5G
倍他司?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):4,4′Dipyridyldisulfide,98%規(guī)格(SP):1G
達(dá)沙星英文名(EN):Diallyldisulfide,≥80%規(guī)格(SP):5G
達(dá)沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名(EN):(Diethylamino)sulfurtrifluoride,≥90%規(guī)格(SP):5ML
ALCAMElisaKit5Bromoisoquinoline5溴異34784048
Tryptic Soy Broth Wi10%胰酪胨大豆肉湯
3Bromo1,1,1trifluoroacetone3溴1,1,1三431356
HDALAOBZL PTOSYLATED氨芐對(duì)41036322
2Ethylfuran23208160
BENZO[C]CINNOLINE并[c]噌啉230171
P(METHYLTHIO)PHENYLACETONITRILE438746928
1,3Diphenylacetone二芐102045
N,N'DiBocLlysine hydroxysuccinimide esterN,N'二叔羰L賴(lài)氨 N二酰亞30189367
4FLUOROPHENYL ISOTHIOCYANATE4異1544689
(S)(+)2,2Dimethylcyclopropanecarboxamide(S)(+)2,2二環(huán)酰75885584
Chuanxiong rhizoMe oil川芎油
D(+)GlucoseD無(wú)水葡萄糖50997
Benzoyl cyanide酰613901
DIPHENYL DISULFIDE二二882337
鞘脂 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 25mg/支
連錢(qián)草 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 1g
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班布特羅 81732469 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 100mg
培哚普利叔鹽 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 100mg
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胡椒(白胡椒) 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 0.5g
石斛 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 約0.4mg/支
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