詳細介紹
操作步驟:
1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
產(chǎn)品名稱 | IAA elisa試劑盒 |
英文名稱 | Mouse insulin autoantibodies, IAA Elisa Kit |
規(guī)格 | 48T/96T |
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關,我司嚴格按照進行,已獲得國家承認的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應的批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用加入到標本稀釋液中使RF降解;
補體的控制方法:
①用EDTA稀釋標本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等;
控制方法:采血時規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標本時采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標本;對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
具有如下優(yōu)點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;
五、性價比非常好,節(jié)省實驗經(jīng)費。
UDPGA尿苷二-α-葡糖200uBR
UDPG尿苷-5ˊ-二葡糖二鹽500u高,
Ub泛素25克BR
UAO脲酶1克BR,40-300u/mg,牛血漿
U5′-P尿苷-5′-單50毫克BR,
Tyrosinedecarboxylase酪脫羧酶25克BR,2500~7000u/mg,豬血
Tyraminehydrochloride對羥基鹽鹽5克BR,
Tween85吐混85500毫克BR
Tween80吐混80100毫克BR,99%
Tween65吐混651克BS
Tween60吐混60500毫克FMP
Tween40吐混401克高,
Tween20吐混20100毫克高,
TV四唑紫100毫克超,99%
TunicamycinfromStreptomyceslysosuperficus衣霉素100克組織培養(yǎng)級,γ-射線滅菌,10mg/ml
IAA elisa試劑盒醉茄粉末提取物標準品 英文名稱:Powdered Ashwagandha Extract 90147436
穿心蓮提取物標準品 英文名稱:Powdered Andrographis Extract 90244841
交聯(lián)聚維標準品 英文名稱:Povidone 9003398
糖鋁標準品 英文名稱:Potassium Sucrose Octasulfate 73264445
山梨標準品 英文名稱:Potassium Sorbate (AS) 24634615
標準品 英文名稱:Potassium Iodide (AS) 7681110
愈創(chuàng)木標準品 英文名稱:Potassium Guaiacolsulfonate 78247491
葡萄糖標準品 英文名稱:Potassium Gluconate 299274
檸檬標準品 英文名稱:Potassium Citrate (AS) 1534146
標準品 英文名稱:Potassium Chloride (AS) 7447407
碳標準品 英文名稱:Potassium Carbonate (AS) 584087
酒石標準品 英文名稱:Potassium Bitartrate (AS) 868144
碳標準品 英文名稱:Potassium Bicarbonate (AS) 298146
標準品 英文名稱:Potassium Benzoate (AS) 582252
醋標準品 英文名稱:Potassium Acetate (AS) 127082
血管緊張素轉酶 進口、國產(chǎn) 英文名稱:ACE 含量:BR,98%
血紅蛋白(牛血) 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Hb 含量:BR,2u/mg
血紅蛋白(豬血) 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Hb 含量:BR,200u/g
血漿凝固子 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Fibrinogenfromhumanplasma 含量:BR,510u/mg
血晶素 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Hematinchloride 含量:IND
雅激酶 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Urokinase 含量:BR,25u/ul,99%
亞氨二醋/N(羧基)甘氨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IDA 含量:BR,98%
亞氨基二亞 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Carbazole 含量:AR,99.7%
亞基琥珀 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Itaconicacid 含量:AR,98%
亞正酯 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Tributylphosphite 含量:BR,97%
測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。