詳細(xì)介紹
操作步驟:
1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
產(chǎn)品名稱 | PGE1ElisaKit |
英文名稱 | rabbit Prostaglandin E1, PGE1 Elisa Kit |
規(guī)格 | 48T/96T |
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行,已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過長(zhǎng)或凝固不全等;
控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
具有如下優(yōu)點(diǎn):
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
五、性價(jià)比非常好,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
Thio-NAD代輔酶5克BR,9u/mg
Thiomichler'sketone4,4-雙(二基)代二100克BS,85%
ThioflavineS四羥S25克BR,470/570NM
ThioflavinT性黃1100微克BR,550/630NM
ThiocarbanilideN,N-二基脲100克CP
ThiazoleOrange噻唑橙25克試級(jí),
THFA四化麩100毫升AR,96%
ThermolysinfromBacillusthermoproteolyticusrokko嗜熱菌蛋白酶25克生物技術(shù)級(jí),30u/mg
Theophylline1,3-二基2KU高,
THAM緩血銨100克高,90%
TG谷酰轉(zhuǎn)酶100克試級(jí),97%,二,三水物
TFEA三25克CP,
Tetraterbiumheptaoxide鋱500克CP,97.5%
Tetrapropylammoniumbromide四溴化銨25克BR,
Tetramethylammoniumiodide化四基銨1克AR,
PGE1ElisaKit泛消旋體標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Panthenol, Racemic 16485102
庫(kù)銨標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Pancuronium Bromide 15500660
胰酶標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Pancreatin Amylase and Protease (COLD SHIPMENT REQUIRED),Diastase vera;Pancrease 8049476
撲標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Pamoic Acid 130858
帕米膦標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Pamidronate Disodium 109552150
棕櫚標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Palmitic Acid 21096
棕櫚油標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Palm Oil (AS) 8002753
對(duì)二氨基異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Padimate O 21245023
紫杉雜質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Paclitaxel Impurity Mixture
紫杉標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Paclitaxel 33069624
羥鑒別標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Oxytocin Identification 6233836
鹽土霉素標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Oxytetracycline Hydrochloride 2058460
土霉素標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Oxytetracycline 6153646
羥標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Oxymorphone CII 76415
羥稀龍標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Oxymetholone CIII 434071
亞錫 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Tin(II)oxide 含量:CP,98%
青霉素 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Piperacillin 含量:BR,牛心,95%
野靛 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Cytisine 含量:BR
野黃芩 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Scutellarin 含量:AR,95%
葉綠醌 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:VK1 含量:顯色
葉綠素A 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:ChlorophyllA 含量:BR,中粘度200
葉綠素 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Chlorophyll 含量:BR,85%
葉綠素鎂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:ChlorophyllB 含量:BR,低粘度100
葉綠銅 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Chlorophyllin 含量:BR,98%
葉 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:PGA 含量:色固
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。