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細(xì)胞增殖科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀：89 發(fā)布時(shí)間：2024-9-18
應(yīng)用簡(jiǎn)介
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞。
檢測(cè)方法
MTT，CCK-8，BrdU，EdU等方法是常見的細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)，分別從代謝活性和DNA合成的角度來反應(yīng)細(xì)胞的增殖情況。MTT和CCK-8檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的一些脫氫酶能使檢測(cè)試劑還原為甲瓚，而死細(xì)胞無此功能。BrdU和EdU則能都在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過基于與熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性。
MTT技術(shù)原理
活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值（OD值），來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)（如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越小）。
實(shí)驗(yàn)方法
1、鋪板密度不合理，均勻度不一致；
2、實(shí)驗(yàn)分組不嚴(yán)謹(jǐn)；
3、實(shí)驗(yàn)設(shè)置時(shí)間點(diǎn)不合理；
4、MTT或CCK8加樣時(shí)注意事項(xiàng)不明確；
5、血清等影響：高濃度血清或藥物顏色會(huì)影響試驗(yàn)孔的吸光度值；
6、邊緣效應(yīng)：邊緣孔的水分揮發(fā)較快，藥物易被濃縮。