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由于超濾離心管使用不恰當(dāng),導(dǎo)致蛋白損失很大如何處理呢?

閱讀:4416      發(fā)布時間:2021-11-16
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  由于超濾離心管使用不恰當(dāng)或是超濾知識缺乏引起的問題,簡直成了實驗汪們蛋白實驗不成功、效率低下的最常見原因之一。比如說:
   為什么截留分子量選擇沒錯,蛋白有時候卻會漏出在濾出液中?
  導(dǎo)致漏蛋白甚至檢測不到蛋白的原因很復(fù)雜,應(yīng)優(yōu)先根據(jù)樣品調(diào)整工藝,因為同一種膜、截留分子量和裝置組合對于不同的蛋白質(zhì)類別甚至物種而言可能并非*之選。
  超濾離心管在選擇過程中,應(yīng)首先執(zhí)行以下步驟:
  1、考慮樣品和分子特性:比如改變pH可能增加構(gòu)象改變的風(fēng)險,而降低溫度可能降低濃縮效率等。
  2、選擇正確的膜:超濾沒有太多的膜選項,但您應(yīng)對再生纖維素(RC)、Hydrosart®和聚醚砜(PES)材料進行測試,以確定哪種材料可為您的特定材料提供低的非特異性結(jié)合和*的回收率。
  3、選擇合適的截留分子量,通常是靶標(biāo)1/3大小的截留分子量適合。但有時則需要更小的孔徑來滿足回收率的要求。如果在病毒和核酸樣品,可參看下面截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表。
  4、選擇合適的裝置:賽多利斯擁有適用于低濃度樣品、DNA、蛋白質(zhì)、病毒、過濾應(yīng)用等廣泛的裝置選項;選擇合適的裝置可以有效改善結(jié)果。
  5、使用合適的裝置處理方法:例如預(yù)沖洗以去除分析物或用非干擾蛋白沖洗以鈍化結(jié)合位點并減少損失。
  6、考慮樣品控制方法,例如使用裝置內(nèi)的“死體積”移走所有截留物,或預(yù)灌裝濾液管以控制截留物的最終體積。

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