類胡蘿卜素（Carotenoid）檢測試劑盒（微板法）

產(chǎn)品貨號：BA1645

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡介：

葉綠體是光合作用的細胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的葉綠體展開下游研究工作。葉綠體中所含的色素主要有兩大類，葉綠素(包括葉綠素a和葉綠素b)和類胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素)，它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，成為色素蛋白復(fù)合體，其中葉綠素又稱葉綠體色素(Chlorophyll)。類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養(yǎng)特性的化合物，給植物和動物提供天然色素，是重要的抗氧化劑，并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素。類胡蘿卜素可預(yù)防細胞，組織和基因損毀，增強身體免疫系統(tǒng)，抵御感染，減少癌癥風(fēng)險，保護心臟。

類胡蘿卜素(Carotenoid)檢測試劑盒(微板法)檢測原理是類胡蘿卜素不溶解于水，而溶于有機溶劑，以有機溶劑粗提類胡蘿卜素，根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質(zhì)濃度(C)和液層厚度(L)成正比，即 A=αCL，其中α為比例常數(shù)，當溶液濃度以百分比濃度為單位，層液厚度為1cm時，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。在本試劑盒情況下，葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素在665nm 、649nm、470nm處有最大吸收波，根據(jù)經(jīng)驗公式可計算出葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素、類胡蘿卜素含量。該試劑盒主要用于植物組織中葉綠素、類胡蘿卜素的提取以及以分光光度計定量檢測葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素、類胡蘿卜素含量。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 研缽或勻漿器

2. 離心管

3. 濾紙或紗布

4. 96孔板、酶標儀

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 類胡蘿卜素提?。?/span>

①取菠菜或其他植物新鮮葉片，洗凈，擦干，去中脈，稱取剪碎的新鮮樣品0.1g，置于研缽或勻漿器，加入少量提取粉劑(約50mg)和1ml Carotenoid Assay buffer，研磨或勻漿成液態(tài)。

②將研磨液或勻漿液轉(zhuǎn)移至10ml離心管，用少量Carotenoid Assay buffer沖洗研缽或勻漿器數(shù)次，最后連殘渣一同倒入10ml離心管，補加Carotenoid Assay buffer至10ml，混勻，避光放置5min-2h。

（注：也可將組織剪碎，加入Carotenoid Assay buffer，避光放置12~36h，期間晃動數(shù)次，使組織與提取試劑充分接觸，當組織接近白色，即表示色素提取完成，可直接進行測定。）

2. 觀察底部組織殘渣接近于白色，即為提取，如果仍有較多組織顏色，應(yīng)再加入Carotenoid Assay buffer繼續(xù)避光放置。

3. 濾紙或三層紗布過濾，留取濾液，即為類胡蘿卜素粗提液。

4. Carotenoid測定：取類胡蘿卜素粗提液加入96孔板，以Carotenoid Assay buffer調(diào)零，酶標儀測定粗提液在665nm、649nm、470nm處吸光度(A₆₆₅、A₆₄₉、A₄₇₀)。

計 算：

葉綠素a含量(mg/g)=C_a×V×N/(W×1000)

葉綠素b含量(mg/g)=C_b×V×N/(W×1000)

總?cè)~綠素含量(mg/g)=C_T ×V×N/(W×1000)

類胡蘿卜素含量(mg/g)=C_C×V×N/(W×1000)

式中：C_a=13.95×A₆₆₅-6.88×A₆₄₉(mg/L)

C_b=24.96×A₆₄₉-7.32×A₆₆₅(mg/L)

C_T=6.63×A₆₆₅+18.08×A₆₄₉(mg/L)

C_C=(1000×A₄₇₀-2.05×C_a -114.8×C_b)/245(mg/L)

=(1000×A₄₇₀-2851.304×A₆₄₉+811.7385×A₆₆₅)/245(mg/L)

V=類胡蘿卜素粗提液體積(ml)=10(ml)

N=稀釋倍數(shù)

W=樣品鮮重或干重(g)

1000=ml與L的單位換算

注意事項：

1. 為避免葉綠素和類胡蘿卜見光分解，操作時應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿時應(yīng)盡量縮短時間。

2. 測定吸光度值大于1時，可適當稀釋后再行測定。

3. Carotenoid Assay buffer易揮發(fā)，不用時需擰緊瓶蓋。

4. 色素粗提液不能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，否則應(yīng)重新過濾。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。