非蛋白質(zhì)巰基含量檢測試劑盒（可見分光光度法）

產(chǎn)品貨號：BA1095

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品簡介：

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自 我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。

技術(shù)指標(biāo)：

檢出限：0.0007μmol/mL

線性范圍：0.003125-0.3μmol/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數(shù)量配制并在當(dāng)天用完；

2. 試劑二：臨用前加入5mL無水甲醇充分溶解備用；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 

1. 動物、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。

2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）然后10000g，常溫離心10min，取上清置冰上待測。

3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液，10000g，常溫離心10min，取上清待 測。

二、測定步驟 

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液稀釋至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3. 操作表：

二、計算公式 

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x軸，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測定代入公式得到x（μmol/mL）。

2. 非蛋白質(zhì)巰基含量計算：

（1）按樣本質(zhì)量計算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W

（2）按血清、培養(yǎng)液體積計算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算

非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/10⁴cell）=x×V提取÷500=0.002×x

V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr，樣本蛋白濃度，mg/ml；500：500萬個細(xì)胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL。

注意事項： 

如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

非蛋白質(zhì)巰基含量檢測試劑盒（可見分光光度法）

產(chǎn)品貨號：BA1095

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品簡介：

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自 我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。

技術(shù)指標(biāo)：

檢出限：0.0007μmol/mL

線性范圍：0.003125-0.3μmol/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數(shù)量配制并在當(dāng)天用完；

2. 試劑二：臨用前加入5mL無水甲醇充分溶解備用；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 

1. 動物、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。

2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）然后10000g，常溫離心10min，取上清置冰上待測。

3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液，10000g，常溫離心10min，取上清待 測。

二、測定步驟 

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液稀釋至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3. 操作表：

二、計算公式 

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x軸，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測定代入公式得到x（μmol/mL）。

2. 非蛋白質(zhì)巰基含量計算：

（1）按樣本質(zhì)量計算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W

（2）按血清、培養(yǎng)液體積計算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算

非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/10⁴cell）=x×V提取÷500=0.002×x

V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr，樣本蛋白濃度，mg/ml；500：500萬個細(xì)胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL。

注意事項： 

如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。