半胱氨酸（Cys）含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1048

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品說(shuō)明：

蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys是一種含有巰基的含硫 氨基酸，從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成，經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補(bǔ)充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色 素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。

Cys還原磷鎢酸生成鎢藍(lán)，在600nm處有吸收峰；通過(guò)測(cè)定600nm吸光度，計(jì)算Cys含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑二：用前一天，向試劑二中加2mL蒸餾水充分溶解，再加磷酸0.5mL，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h；冷卻后加8mL蒸餾水，4℃可保存2周。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸。將標(biāo)準(zhǔn)品加入4.13mL蒸餾水，可得到20μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。4℃可以保存4周。

技術(shù)指標(biāo)：

檢出限：0.0066μmol/mL

線性范圍：0.03125-3μmol/mL

 所需的儀器和用品：

低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、磷酸和蒸餾 水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 液體樣本中半胱氨酸提?。喝?/span>0.2mL液體樣本，加提取液0.3mL，充分混勻，11000rpm 4℃離心10min，取上清液待測(cè)。

2. 組織中半胱氨酸提?。悍Q取約0.2g組織，加入提取液0.5mL，冰上充分研磨，11000rpm 4℃離心10min，取上清液待測(cè)。

二、測(cè)定步驟 

1. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到600nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液的配制：將標(biāo)準(zhǔn)品加入0.826mL蒸餾水，可得到100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，然后用蒸餾水稀釋為2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. 按下表步驟加樣：

混勻后室溫靜置15min，于600nm處測(cè)定吸光值。

三、半胱氨酸含量計(jì)算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，以?A（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）為y軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。將（A測(cè)定管-A 對(duì)照管）帶入方程求x值。

2. 半胱氨酸含量計(jì)算：

（1）按液體樣本的體積計(jì)算

半胱氨酸含量（μmol/mL）=x×V樣總÷V樣1= 2.5x

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

半胱氨酸含量（μmol/g 質(zhì)量）= x×V樣2÷（W×V樣2÷V樣總）=0.5x÷W

V樣1：提取體系中加入的樣本體積，0.2mL；V樣2：反應(yīng)體系中加入的樣本體積，0.04mL；V樣總：提取體系體積，0.5mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。