血清中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括各種蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，其中一些物質(zhì)在特定的條件下容易形成沉淀。無(wú)論血清產(chǎn)地、品質(zhì)如何，血清凍融后產(chǎn)生沉淀是無(wú)法避免的，因此各類血清以及含有血清的產(chǎn)品都可能會(huì)產(chǎn)生沉淀。
血清沉淀類型
血清中的沉淀主要為兩類：
一類是絮狀沉淀，這是血清中的纖維蛋白原在解凍過(guò)程中轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而形成的，絮狀物較大時(shí)肉眼可見(jiàn)。
▲ 纖維蛋白絮狀沉淀
一類是白色顆粒樣沉淀，主要是血清中的磷酸鈣的析出。也有部分脂蛋白、膽固醇、冷凝集素、玻連蛋白、胎球蛋白等一些脂質(zhì)或蛋白質(zhì)析出。在顯微鏡下可呈現(xiàn)為黑點(diǎn)樣物質(zhì)，有時(shí)會(huì)隨著液體晃動(dòng)，因此常常與細(xì)胞碎片或細(xì)菌污染混淆。
如何去除血清沉淀
通過(guò)2000rpm 5min離心，取上清，即可去除大部分沉淀。但由于部分沉淀細(xì)小且在使用過(guò)程中可能繼續(xù)產(chǎn)生析出沉淀現(xiàn)象，因此很難wan全清除血清內(nèi)的沉淀。
不建議過(guò)濾去除沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)很快堵住濾膜導(dǎo)致過(guò)濾效果下降。
如何減少血清沉淀產(chǎn)生
血清出現(xiàn)沉淀是和血清的品質(zhì)沒(méi)有必然關(guān)系，并不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。然而過(guò)多的沉淀可能會(huì)妨礙實(shí)驗(yàn)者對(duì)細(xì)胞的觀察，有時(shí)難以和微生物污染區(qū)分，影響實(shí)驗(yàn)者對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的判斷。
那么如何避免血清產(chǎn)生過(guò)多沉淀呢？造成沉淀過(guò)多產(chǎn)生的主要原因有熱滅活、長(zhǎng)時(shí)37℃或室溫放置，反復(fù)凍融等。因此為了避免沉淀過(guò)多，應(yīng)當(dāng)正確使用和保存血清：
l 冰凍的血清使用前放2-8℃冰箱過(guò)夜融化
l 室溫或水浴融化將會(huì)加速沉淀的產(chǎn)生
l 融化后上下顛倒混勻，不要?jiǎng)×覔u晃
l 解凍后盡快使用完
l 非必須不滅活
l 不要反復(fù)凍融
如何區(qū)分血清沉淀和污染
纖維蛋白絮狀沉淀有時(shí)會(huì)被誤認(rèn)為霉菌。鏡下觀察，纖維蛋白沉淀呈現(xiàn)透明絮狀，形態(tài)無(wú)規(guī)則。而霉菌形態(tài)較規(guī)則，有明顯的菌絲。二者還是比較容易分辨的。
▲ 左圖：血清沉淀 右圖：霉菌
磷酸鈣沉淀在鏡下為小黑點(diǎn)，常與細(xì)菌混淆。細(xì)菌通常會(huì)在1-2天內(nèi)迅速增殖，導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁。而磷酸鈣沉淀在37℃會(huì)緩慢析出。將血清取樣空培養(yǎng)時(shí)，可以明顯看到黑色顆粒且可能隨培養(yǎng)時(shí)間增加而增多，該現(xiàn)象為高溫下析出增多現(xiàn)象并非污染，因此不建議采用空培養(yǎng)作為血清檢菌的方式。
若您確實(shí)對(duì)血清產(chǎn)品有污染疑慮，建議取少量血清涂布LB平板進(jìn)行檢菌。
總之，了解血清中沉淀物的類型和正確的處理方法是非常重要的。通過(guò)合理的處理和預(yù)防措施，可以有效地減少血清沉淀。
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