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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

由一名 24 歲白人女性的胎盤滋養(yǎng)層腫瘤建立，但細(xì)胞系來自男性胎兒。這可能是一種假三倍體人類細(xì)胞系，其模態(tài)染色體數(shù)為 68，出現(xiàn)在 24% 的細(xì)胞中，但同時(shí)具有 69 (22%) 和 70 (18%) 染色體計(jì)數(shù)的細(xì)胞也經(jīng)常出現(xiàn)。具有更高倍性的細(xì)胞出現(xiàn)在 7.0%。核型極其復(fù)雜。每個(gè)細(xì)胞始終有 20 到 25 條標(biāo)記染色體（> 總?cè)旧w含量的 30%）。大多數(shù)標(biāo)記染色體具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)重排，這些標(biāo)記的染色體片段的起源往往難以鑒定。只有一條正常的X染色體。未發(fā)現(xiàn)正常 N3 和 N13。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：人 絨毛絨膜癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣 貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1．準(zhǔn)備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (推薦：awcell-0002)，優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S  1 % Sodium Pyruvate丙酮酸鈉(推薦：awcell-01100 ) 1 %

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。