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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

人前列腺癌細(xì)胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。這株細(xì)胞對5-α-二氫睪酮(生長調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。

l 培養(yǎng)條件：

1) 準(zhǔn)備： 1640 （推薦awcell-0002）; 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%; Glutamax（invitrogen 35050） 1%; Sodium pyruvate（invitrogen 11360070) 1 %;   p/s 1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

培養(yǎng)注意事項：

a. 需使用Corning的cellbind細(xì)胞培養(yǎng)瓶,貨號是3289 。

b. 這株細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落。傳代時如胰酶消化后細(xì)胞形成聚團(tuán)，可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。

c. 該細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。 生長很慢。 傳代后48小時內(nèi)不應(yīng)擾動。

d. 細(xì)胞封包、寄出時，多數(shù)細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。 收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24到48小時，以使細(xì)胞再貼壁。 此后可以換上新鮮培養(yǎng)液。 如果需要，培養(yǎng)瓶內(nèi)容物可以收集，300g離心15分鐘，以適量培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。