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l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

1976年R. Cailleau等從一位48歲白人女性腫瘤轉移患者胸水中建立了MDA-MB-453細胞株，其它轉移灶包括淋巴結，腦和胸水及心包腔積水。該細胞過表達FGF受體。

l 細胞特性

1） 來源：乳腺；源自轉移灶：心包積液

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，混合生長，貼壁與懸浮細胞同時存在。

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準備L15（推薦awcell-0009）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，100%；該細胞培養(yǎng)不能通入CO2， 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

注意事項：

a. 無CO2培養(yǎng)。如果沒有條件準備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。

b. 細胞形態(tài)是貼壁生長及懸浮生長混合，貼壁細胞形態(tài)是上皮樣（立方形或多邊形），但也有一些單個或成團的懸浮細胞。

c. 細胞復蘇后一段時間內(nèi)，貼壁不牢，大部分細胞呈懸浮狀態(tài)，懸浮細胞不要丟棄，換液或傳代時可以將懸浮細胞收集離心后，重新加入細胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。

該細胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細胞，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。