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l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞特性

1） 來源：人、女性、外周血

2） 形態(tài)：成淋巴瘤細胞，懸浮和輕微的貼壁

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6）用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準備1640（推薦：awcell-0002）基礎培養(yǎng)基, 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S青霉素-鏈霉素 1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

注意事項：

a.該細胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。

b.該細胞復蘇后需培養(yǎng)2周左右時間，才能恢復正常生長狀態(tài)。

c.細胞密度不可過高，在細胞匯合前進行傳代，否則容易成團。

參考傳代比例: 1:3-1:6，參考換液頻率: 2-3天

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1） 懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加*培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細胞對密度要求不同，具體可以參考細胞說明書）可以維持細胞的正常生長。懸浮細胞的收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2)．貼壁細胞的的消化，pbs清洗1-2次 由于細胞貼壁不牢，pbs清洗過程中會有細胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細胞按正常的貼壁細胞處理。加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來終止消化。

3）將收集到的懸浮細胞，消化下貼壁細胞和pbs清洗液中的細胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3 細胞凍存：收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。