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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過(guò)

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：人、女性、外周血

2） 形態(tài)：成淋巴瘤細(xì)胞，懸浮和輕微的貼壁

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6）用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備1640（推薦：awcell-0002）基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S青霉素-鏈霉素 1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

注意事項(xiàng)：

a.該細(xì)胞同時(shí)存在懸浮生長(zhǎng)和輕微的貼壁狀態(tài)。

b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時(shí)間，才能恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài)。

c.細(xì)胞密度不可過(guò)高，在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代，否則容易成團(tuán)。

參考傳代比例: 1:3-1:6，參考換液頻率: 2-3天

該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1） 懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加*培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，具體可以參考細(xì)胞說(shuō)明書(shū)）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。懸浮細(xì)胞的收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2)．貼壁細(xì)胞的的消化，pbs清洗1-2次 由于細(xì)胞貼壁不牢，pbs清洗過(guò)程中會(huì)有細(xì)胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細(xì)胞按正常的貼壁細(xì)胞處理。加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3）將收集到的懸浮細(xì)胞，消化下貼壁細(xì)胞和pbs清洗液中的細(xì)胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3 細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。