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　　一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基

　　經(jīng)典基礎(chǔ)培養(yǎng)基（DMEM、MEM、RPMI等）是化學(xué)成分明確的配方，每種配方都是為支持特定的細(xì)胞系或培養(yǎng)條件而開發(fā)的。

　　許多基礎(chǔ)培養(yǎng)基起初是使用小鼠成纖維細(xì)胞、HeLa或CHO細(xì)胞系開發(fā)的，并且隨著時(shí)間的推移進(jìn)行修改已經(jīng)建立了適用于多種細(xì)胞類型的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。DMEM/F12是一種使用較為廣泛的干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，它實(shí)質(zhì)是由(Ham's F12培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基的1:1混合物.

　　常見的幾種基礎(chǔ)培養(yǎng)基：

　　RPMI培養(yǎng)基：由洛斯維·帕克紀(jì)念研究所研發(fā)

　　BME培養(yǎng)基：屬于Eagle的基礎(chǔ)培養(yǎng)基

　　MEM培養(yǎng)基：屬于改良的Eagle培養(yǎng)基

　　DMEM培養(yǎng)基：Dulbecco改良型培養(yǎng)基

　　二、緩沖液

　　干細(xì)胞培養(yǎng)基在滿足培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)需求之外，還要注意細(xì)胞的培養(yǎng)條件。多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長的PH值為：在7.4的左右，所以，維持相對(duì)穩(wěn)定的PH環(huán)境也很重要。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)由于加入了二氧化碳，此時(shí)會(huì)產(chǎn)生HCO3-從而降低培養(yǎng)基中的pH值。

　　三、碳酸氫鈉

　　為了穩(wěn)定CO 2培養(yǎng)箱內(nèi)pH值的變化，碳酸氫鈉(NaHCO 3)是一種無毒的天然緩沖液，通常包含在干細(xì)胞培養(yǎng)基中。作為一般經(jīng)驗(yàn)法則，當(dāng)在5%CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時(shí)，需要1.5 g/L的NaHCO 3以將培養(yǎng)基的pH值保持在7.4。

　　H 2 O+CO 2↔H 2 CO 3↔H++HCO 3¯

　　NaHCO 3↔Na++HCO 3¯

　　上面公式所表達(dá)的是：細(xì)胞培養(yǎng)基中的CO 2產(chǎn)生酸性條件。碳酸氫鈉緩沖該反應(yīng)。

　　四、肝素

　　HEPES是一種兩性離子有機(jī)緩沖液，它的主要作用也是為了維持培養(yǎng)基的pH值。如果您所培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)PH環(huán)境較為敏感時(shí)，建議添加HEPES，這樣不僅可以增加緩沖能力還能夠?qū)H值穩(wěn)定在7.2至7.6范圍內(nèi)。

　　五、酚紅

　　除了二氧化碳水平以外，細(xì)胞的代謝產(chǎn)物、培養(yǎng)基添加劑或其他因素同樣會(huì)影響到干細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值。所以，在培養(yǎng)基和干細(xì)胞培養(yǎng)基中也常常會(huì)添加酚紅作為視覺pH指示劑，在pH值為7.4左右時(shí)，含有酚紅的培養(yǎng)基會(huì)呈現(xiàn)紅色，并且會(huì)隨著pH值的波動(dòng)從亮黃色到深紫色不等。如果您的細(xì)胞對(duì)雌激素比較敏感，請(qǐng)選擇不含酚紅的培養(yǎng)基，因?yàn)檫@種化合物會(huì)模仿某些類固醇激素的作用。

　　六、酸堿度

　　干細(xì)胞培養(yǎng)基銷售

　　圖為不同PH值下培養(yǎng)基中酚紅的視覺展示效果。

　　七、谷氨酰胺

　　細(xì)胞所需要的營養(yǎng)物質(zhì)還包括：必需氨基酸和維生素。其中L-谷氨酰胺是多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基所需要的一種添加劑，它的主要作用是促進(jìn)氮的儲(chǔ)存與向培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。還有谷氨酰胺也常常會(huì)添加在干細(xì)胞培養(yǎng)基中，主要作用是在高能量需求時(shí)作為能量來源使用。所以，一般適用于增殖迅速的細(xì)胞類型或在低氧、低代謝條件下培養(yǎng)的細(xì)胞。

　　然而，在培養(yǎng)基介質(zhì)中時(shí)，游離L-谷氨酰胺比較不穩(wěn)定。比如：在環(huán)境溫度大于4°C時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會(huì)經(jīng)過非酶促反應(yīng)降解為NH3-和焦谷氨酸。所以，一般情況下，L-谷氨酰胺必須在-20°C的低溫條件下冷凍保存。

　　八、L-丙氨酰/L-谷氨酰胺

　　L-丙氨酰和L-谷氨酰胺也是常添加在干細(xì)胞培養(yǎng)基中的物質(zhì)，起主要作用是：谷氨酰胺的穩(wěn)定性降低谷氨酰胺的分解速度。例如，L-丙氨酰-L-谷氨酰胺是一種二肽，即使在37°C下也能在細(xì)胞培養(yǎng)基中長期穩(wěn)定。用L-丙氨酰-L-谷氨酰胺補(bǔ)充干細(xì)胞培養(yǎng)基可以延長培養(yǎng)基在4°C下的保質(zhì)期，并大大減少與谷氨酰胺分解成氨廢物相關(guān)的問題。

　　九、生長因子和培養(yǎng)基添加劑

　　1.生長因子

　　生長因子、細(xì)胞因子和趨化因子是細(xì)胞的化學(xué)信使。每種干細(xì)胞類型都需要補(bǔ)充特定生長因子的培養(yǎng)基，以維持或指導(dǎo)培養(yǎng)物的健康、增殖和分化。例如，在人胚胎干細(xì)胞ES和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞iPS細(xì)胞培養(yǎng)基中通常會(huì)添加bFGF生長因子。干細(xì)胞培養(yǎng)基中使用的生長因子的質(zhì)量會(huì)對(duì)培養(yǎng)產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。比如：使用高生物活性、高純度的蛋白質(zhì)折疊及生長因子可以獲得較好的蛋白重組效果。雖然生長因子和細(xì)胞因子在處于凍干狀態(tài)時(shí)性能穩(wěn)定，但當(dāng)他們添加到培養(yǎng)基中時(shí)它的保質(zhì)期就會(huì)變得很短。為避免成分降解，一般會(huì)在使用前將它們添加到培養(yǎng)基中。

　　2.氨基酸

　　細(xì)胞培養(yǎng)基中還經(jīng)常添加非必需氨基酸(NEAA)來刺激細(xì)胞的增殖并延長細(xì)胞的活力。雖然細(xì)胞也可以自然合成NEAA，但在培養(yǎng)基中補(bǔ)充非必需氨基酸可以減少低水平氨基酸水平所帶來的的副作用。

　　3.抗生素

　　實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用補(bǔ)充抗生素來控制在營養(yǎng)豐富的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中可能出現(xiàn)的細(xì)菌污染物的生長。除了原代細(xì)胞分離以外，不建議在干細(xì)胞培養(yǎng)中使用抗生素，因?yàn)槌Ｒ?guī)的抗生素雖然可以防止污染發(fā)生，但是容易導(dǎo)致耐藥菌株的出現(xiàn)，甚至?xí)蓴_到細(xì)胞的正常代謝。

　　十、血清以及血清替代品

　　1.血清

　　多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在培養(yǎng)基中添加血清。用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清包含蛋白質(zhì)、肽、生長因子、氨基酸、脂質(zhì)、碳水化合物、激素、維生素等多種細(xì)胞所需的營養(yǎng)成分。干細(xì)胞培養(yǎng)基的胎牛血清(FBS)添加含量通常含在10%至20%之間。

　　2.無血清培養(yǎng)基

　　無血清(SF)培養(yǎng)基允許研究人員在無血清的情況下培養(yǎng)干細(xì)胞。無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基的主要優(yōu)點(diǎn)是從更純的培養(yǎng)基配方中獲得一致且可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般來說，無血清培養(yǎng)基被認(rèn)為是成分確定的培養(yǎng)基，含有白蛋白、胰島素、硒和轉(zhuǎn)鐵蛋白來代替FBS。然而，成分確定的無血清培養(yǎng)基可包括血清來源的蛋白質(zhì)，例如人血清白蛋白(HSA)。

　　重要的是要知道，干細(xì)胞在無血清環(huán)境中培養(yǎng)時(shí)會(huì)更加敏感。這在形態(tài)學(xué)、細(xì)胞密度、增殖率以及對(duì)機(jī)械和化學(xué)應(yīng)力（包括解離酶和抗生素）的敏感性方面尤其明顯。例如，如果在無血清培養(yǎng)基中使用抗生素，通常最好使用終濃度為通常用于含血清培養(yǎng)基的1/5至1/10。

　　對(duì)于實(shí)驗(yàn)要求不高的用戶或者想節(jié)約成本可以使用干粉培養(yǎng)基自行配制，但多數(shù)情況下都會(huì)選擇配置好的培養(yǎng)基或干細(xì)胞培養(yǎng)基，這樣開瓶后就能直接使用了。不僅可以節(jié)約時(shí)間，還省去了配制時(shí)的繁瑣環(huán)節(jié)。