是否每一個細胞都有特定的參數(shù)?
不是。即使是同一個細胞,電轉實際上也沒有單一的參數(shù),需要根據(jù)實驗需要的細胞密度以及溫度和DNA情況加以預先測試。
另外,同樣的細胞在不同的實驗室培養(yǎng)條件下可能需要不同的參數(shù),因此本網(wǎng)站有推薦參數(shù)供客戶參考。對于沒有推薦參數(shù)的細胞,可以選擇類似直徑的細胞參數(shù)進行測試。
為什么每次同樣的細胞進行電轉,有的時候結果不一樣?
很多客戶在剛剛接觸電轉實驗的時候都會遇到這個問題,因為影響電轉效果的因素有很多,比如:細胞密度、溫度、DNA質量等。我們都會建議客戶在首次做一個新的細胞電轉時可以從推薦的參數(shù)出發(fā)來做個簡單GFP測試找到合適的參數(shù)。
初次實驗建議按照推薦電壓上下隔20V測試,盡量把預先測試的實驗條件控制得與正式實驗一致,比如測試的時候細胞密度、培養(yǎng)方式、質粒用量等。另外,同樣的細胞在不同的實驗室培養(yǎng)條件下可能需要不同的參數(shù),因此推薦參數(shù)僅供參考。通常GFP熒光在電轉1-3個小時后可通過顯微鏡進行觀察,過夜培養(yǎng)后熒光表達更強。