Cell Freezing Medium Plus (1x)

Especially suitable for lymphocyte and stem cell cryopreservation

 Catalog Number：PZ210R

01/產(chǎn)品概述

細(xì)胞藥物作為繼化學(xué)藥、生物藥之后出現(xiàn)的新型藥物在臨床上的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。尤其，干細(xì)胞治療和免疫細(xì)胞治療在退行性、損傷性、遺傳缺陷性疾病以及腫瘤的治療中具有巨大的優(yōu)勢(shì)和廣闊的發(fā)展前景，而高效安全的細(xì)胞制劑是細(xì)胞治療中的關(guān)鍵因素。在細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞凍存是最關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，尤其在細(xì)胞治療、細(xì)胞存儲(chǔ)中對(duì)細(xì)胞凍存更有特殊要求。

傳統(tǒng)的程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養(yǎng)基、血清、DMSO。血清大多采用胎牛血清，含有動(dòng)物源性物質(zhì)，成分復(fù)雜，血清中未知成分和病毒等感染物質(zhì)會(huì)給凍存帶來(lái)影響與風(fēng)險(xiǎn)。該方法在科研上廣泛使用，但是顯然已經(jīng)不能適應(yīng)現(xiàn)今細(xì)胞治療的應(yīng)用場(chǎng)景。

針對(duì)干細(xì)胞和免疫細(xì)胞的凍存，LeapWal^TM Biotech推出一款Cell Freezing Medium Plus (1x)，是一種化學(xué)成分明確、無(wú)動(dòng)物源成分、使用醫(yī)藥級(jí)原料的即用型細(xì)胞凍存液，尤其適合淋巴細(xì)胞和干細(xì)胞的凍存。這款產(chǎn)品操作簡(jiǎn)單，無(wú)需程序降溫，無(wú)動(dòng)物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低，不僅能有效、安全地保護(hù)細(xì)胞，同時(shí)，使用藥用級(jí)原料，所有成分均明確，極大降低批次間差異。適用于干細(xì)胞、免疫細(xì)胞以及大多數(shù)細(xì)胞系凍存。

02/產(chǎn)品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。若長(zhǎng)期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24個(gè)月。

04/產(chǎn)品特點(diǎn)

即用型細(xì)胞凍存液，無(wú)需程序降溫，可直接凍存于-80℃冰箱，長(zhǎng)期保存（>5年）

安全性高，無(wú)動(dòng)物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低

復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率優(yōu)異，復(fù)蘇率高達(dá)90% 以上，細(xì)胞活力好

使用藥用級(jí)原料，所有成分均明確，極大降低批次間差異

05/實(shí)驗(yàn)流程概要

06/實(shí)驗(yàn)步驟

一：細(xì)胞凍存步驟

1. 選擇處于指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。

? 按照細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶ 至5x10⁶ cells/mL。

4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，建議每管1mL或1.5mL。

5. 直接將細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長(zhǎng)期冷凍保存。如果想放入液氮中長(zhǎng)期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小時(shí)，方可移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。

二：凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養(yǎng)基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細(xì)胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的含*培養(yǎng)基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀，棄上清（操作時(shí)小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中，輕輕搖晃培養(yǎng)容器，使細(xì)胞分布均勻。

5. 鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法進(jìn)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)5-24h后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，可視情況更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。

07/適用范圍

LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 適用于干細(xì)胞、免疫細(xì)胞以及大多數(shù)細(xì)胞系凍存。該款凍存液使用藥用級(jí)原料，化學(xué)成分明確，適合細(xì)胞儲(chǔ)存、細(xì)胞治療以及科學(xué)研究等不同場(chǎng)景使用。

08/質(zhì)量控制

LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 通過(guò)嚴(yán)格的內(nèi)毒素、滲透壓、pH測(cè)試和無(wú)菌檢測(cè)（細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè)）。

09/注意事項(xiàng)

1. 若長(zhǎng)期不用，本產(chǎn)品可-30℃至-10℃保存，再次使用時(shí)，請(qǐng)?jiān)?/span>2-8℃融化LeapWal^TM  Cell Freezing Medium Plus(1x)，避免反復(fù)凍融。

2. 使用LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 凍存細(xì)胞后，應(yīng)盡量減少凍存細(xì)胞在外存放時(shí)間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長(zhǎng)期保存。

3. LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 尤其適合淋巴細(xì)胞或干細(xì)胞凍存，建議第一次使用本產(chǎn)品凍存細(xì)胞時(shí)，先對(duì)其進(jìn)行試驗(yàn)性?xún)龃?、?fù)蘇、培養(yǎng)的預(yù)實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)性能后再進(jìn)行正式凍存。

4. 該產(chǎn)品在室溫條件下放置的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免影響凍存效率。

5. 免責(zé)聲明: 本公司將不為任何不正當(dāng)使用此產(chǎn)品所發(fā)生的意外負(fù)責(zé)。

6. 為了您的健康安全，請(qǐng)規(guī)范操作，穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

7. 本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療。

10/實(shí)驗(yàn)案例分析

一、凍存細(xì)胞復(fù)蘇存活率檢測(cè)

1. 選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的淋巴細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集細(xì)胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。凍存密度為1x10⁶ cells/mL。

4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存12個(gè)月后，進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，對(duì)復(fù)蘇后的細(xì)胞進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞存活率。

二、凍存細(xì)胞復(fù)蘇生長(zhǎng)曲線檢測(cè)

1. 選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的淋巴細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集細(xì)胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal^TM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。凍存密度為2x10⁵ cells/mL。

4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存1個(gè)月后進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，對(duì)復(fù)蘇后的細(xì)胞進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色，繪制生長(zhǎng)曲線。

11/其他相關(guān)產(chǎn)品