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湖南立譜沃生物科技有限公司
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當前位置:湖南立譜沃生物科技有限公司>>細胞系>>野生型細胞系>> CL010017KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞

KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞

參  考  價:2000
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

    CL010017

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    長沙市

規(guī)格

T25 2000元 10000瓶可售

更新時間:2023-03-27 21:16:59瀏覽次數(shù):917次

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KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞
(Human Ovarian Granulosa Tumor Cells)
收到細胞后,請檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損、干冰已完*揮發(fā)等問題,請立即
拍照,并即時聯(lián)系工作人員處理。

KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞

(Human Ovarian Granulosa Tumor Cells)

KGN.jpg


KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞

一、T25 細胞收到后處理

1、觀察

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿完*培養(yǎng)基并密封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細胞后,請

先打開外包裝,及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致,并仔細查看培養(yǎng)瓶是否有

破損或漏液等異常情況,如有破損或漏液等異常情況,請立即拍照,并聯(lián)系工作人員處理。

2、處理

(1)75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。

(2)待酒精揮發(fā)完*,在顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(40x,100x,200x,

各三張)。前三天的細胞照片為重要的售后依據(jù),不提供照片默認收到時細胞狀態(tài)良好。

(3)不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞放入培養(yǎng)箱中靜置 2-4 小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

(4)查看細胞說明書,按照細胞說明書中描述的培養(yǎng)參數(shù)進行常規(guī)細胞培養(yǎng)操作(見“細胞說明書"第一

頁)。 ? 貼壁細胞

? 未超過 80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中(對比培養(yǎng)使用),留大約

7mL 完*培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)瓶中,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

? 超過 80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中(對比培養(yǎng)使用),根據(jù)情況進

行傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首*傳代,建議 1:2 進行傳代(分兩個 T25)。傳代時

建議一瓶用原瓶中的完*培養(yǎng)基,另外一瓶用自行配制的完*培養(yǎng)基,二者進行對比培養(yǎng)。

? 若細胞貼壁不牢,在運輸過程中容易發(fā)生細胞脫落,這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶中所有培養(yǎng)液收集至

50mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,收集上清(對比培養(yǎng)使用),往細胞沉淀中加入胰,酶 1-2mL,

輕輕吹打,重懸,消化 1-2 分鐘后,加入 5mL 完*培養(yǎng)基終止消化。1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上

清,加入 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸細胞。然后按 1:2 的比例進行傳代(分兩個 T25),補充完*培養(yǎng)基

至 5-8mL/瓶,放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 二、凍存細胞收到后處理

1、觀察

收到細胞后,請檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損、干冰已完*揮發(fā)等問題,請立即

拍照,并聯(lián)系工作人員處理。

2、處理

(1)迅速將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮保存,建議盡早復蘇。

(2)復蘇第一管如有細胞活性問題,請對細胞進行不同倍數(shù)拍照(40x,100x,200x,各三張),并及時

聯(lián)系工作人員處理,后續(xù)會有技術(shù)人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說明:未與我方聯(lián)系擅自復蘇

第二管,出現(xiàn)問題不予售后。

三、細胞復蘇

(1)確認水浴鍋已升溫至 37℃,取 5mL 預(yù)熱的完*培養(yǎng)基于 15mL 離心管中待用。

(2)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中

無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

(3)將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含 5mL 完*培養(yǎng)基的 15mL 離心管中,1000rpm 離心 5 分鐘。

(4)棄盡上清,細胞沉淀用 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸,接種至 T25 培養(yǎng)瓶,補充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶,

放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(5)貼壁 5 小時以上或次日,更換新鮮的完*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 四、細胞傳代

(1)細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。首先,棄去培養(yǎng)上清,用 PBS 漂洗細胞 1-2 次。

(2)加入 1-2mL 消化液,置于培養(yǎng)箱中消化適當時間,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部

分變圓并脫落,即消化完*,將細胞迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血

清的完*培養(yǎng)基終止消化。

(3)輕輕吹打細胞,待細胞完*脫落后轉(zhuǎn)移至 15mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘。

(4)棄去上清液,然后按推薦比例進行分瓶傳代(收到細胞后首*進行傳代,推薦 1:2 比例進行分瓶傳

代),補充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶。

(5)放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。 五、細胞凍存

(1)細胞生長狀態(tài)良好,細胞密度達 80%-90%,即可進行細胞凍存。首先,棄去培養(yǎng)上清,用 PBS 漂洗

細胞 1-2 次。

(2)加入 1-2mL 消化液,置于培養(yǎng)箱中消化適當時間,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部

分變圓并脫落,即消化完*,將細胞迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血

清的完*培養(yǎng)基終止消化。

(3)輕輕吹打細胞,待細胞完*脫落后轉(zhuǎn)移至 15mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘。

(4)棄去上清液,往細胞沉淀中加入 1mL/支的立譜沃無血清凍存液(貨號:PZ110R),混勻后加入凍存

管中,并做好標記。

(5)將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可(如果追求更理想的細胞復蘇率,也可選擇使用程序降溫盒),

24 小時后轉(zhuǎn)入液氮中長期儲存,并做好儲存記錄。


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