SRM2374外部RNA控制的DNA序列庫標(biāo)準(zhǔn)品NIST旨在用作使用體外轉(zhuǎn)錄 (IVT) 進行核糖核酸 (RNA) 對照合成的模板。這些 RNA 對照旨在用作外部對照或“加標(biāo)"對照，通過對基因表達(dá)測量的技術(shù)性能進行定量評估來支持基因表達(dá)測定的可信度。一個 SRM 單元包含 96 個不同的 0.5 mL 聚丙烯管，其中通過吸光度 (A260) 測量，每個脫水質(zhì)粒脫氧核糖核酸 (DNA) 約為 10 µg。

每個試管都含有質(zhì)粒 DNA，其具有*的模板序列，用于不同的外部 RNA 對照。這些控制是與外部 RNA 控制聯(lián)盟 (ERCC) 合作開發(fā)的。

這些模板可以很容易地用于制作 RNA 控制（參見圖 1）。根據(jù)轉(zhuǎn)錄的鏈，對照將模擬“有義"或“反義"真核信使 RNA (mRNA)。當(dāng)用于制造有義對照 RNA 時，每個對照在 3' 端將有一個標(biāo)稱的 24 個核苷酸 (nt) 多聚腺苷酸 (polyA) 片段。由它們產(chǎn)生的 DNA 模板和 RNA 轉(zhuǎn)錄本在圖 2 和圖 3 中進行了注釋和描述。對照序列范圍從 273 nt 到 2022 nt，GC 分?jǐn)?shù) (1) 有兩種群體分布，一種以 35% GC 為中心，另一種以 47% 為中心。

認(rèn)證特性：

SRM2374外部RNA控制的DNA序列庫標(biāo)準(zhǔn)品NIST 的認(rèn)證特性是 ERCC 對照插入片段的 DNA 序列。核苷酸身份使用國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會 (IUPAC) 核苷酸符號進行編碼，包括序列中幾個堿基的歧義代碼。表 2 包括，對于每個組件，對包含國家生物信息中心 (NCBI) GenBank 數(shù)據(jù)庫中認(rèn)證序列的記錄的引用。經(jīng)認(rèn)證的序列可從 NIST 以 FASTA 格式的數(shù)據(jù)文件 [1] 獲得，與此證書相關(guān)聯(lián)。

由于被測量是標(biāo)稱屬性（核苷酸序列）的值，因此不能使用符合 JCGM GUM [2] 的測量不確定度的常規(guī)評估和表達(dá)。相反，與每個核苷酸相關(guān)的不確定性以表示對規(guī)定值的信念強度的順序標(biāo)度表示（0 = 最有信心，1 = 非常有信心，2 = 有信心，3 = 模棱兩可）。與序數(shù)尺度水平相關(guān)的序列數(shù)據(jù)的特征在表 1 中進行了描述（參見“Certified Properties Confidence Estimates"）。這些置信度估計值可在隨附的 FASTA 格式文件 [1] 中獲得。

在缺乏*發(fā)展的身份計量學(xué)（目前的事態(tài)）的情況下，一種務(wù)實的前進方式是將這些 DNA 序列視為從文庫轉(zhuǎn)錄的 RNA 對照的“身份可比性"的來源。