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皖儀科技離子色譜助力醫(yī)療健康檢測(cè)

引言：胱氨酸(Cystine）是人體必需的氨基酸，能協(xié)助皮膚的形成，且對(duì)解毒作用很重要，借由減低身體吸收銅的能力，胱氨酸保護(hù)細(xì)胞免于銅中毒。當(dāng)它被代謝時(shí)，會(huì)釋放硫酸，而硫酸會(huì)與其他物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)作用，增加整個(gè)代謝系統(tǒng)的解毒功能。此外，它輔助胰島素的供給，胰島素是人體利用糖和淀粉所必需的。也能促進(jìn)細(xì)胞氧化還原，使肝功能旺盛，促進(jìn)白細(xì)胞增生，阻止病原菌發(fā)育。但過(guò)量服用會(huì)有副作用，主要臨床表現(xiàn)為尿路結(jié)石。

胱氨酸尿（cystinuria）指尿中有大量胱氨酸，是一種比較常見(jiàn)的遺傳性疾病，由腎小管胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)缺陷引起。任何年齡均可發(fā)生，兒童多見(jiàn)。本病多易形成尿路結(jié)石，結(jié)石一般在膀胱中形成，臨床常表現(xiàn)為腎絞痛、血尿、發(fā)熱、尿頻、尿急和尿痛、腎功能不全等。本病尚無(wú)根治方法，多采取對(duì)癥治療，主要防治結(jié)石形成及其并發(fā)癥。

尿中過(guò)量胱氨酸可通過(guò)硝普鹽氰化物試驗(yàn)檢出。色譜法和電泳可進(jìn)一步明確診斷結(jié)果，提供準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。色譜法常見(jiàn)測(cè)試胱氨酸的方法有液相色譜-質(zhì)譜法等，本次采用的是離子色譜測(cè)試尿液中的胱氨酸。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 測(cè)試條件

儀器：IC6600系列離子色譜儀配置柱后衍生模塊

色譜柱：陽(yáng)離子分析柱

柱溫：30℃；

流速：分析泵流速：0.3mL/min；

柱后堿液流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：25μL；

檢測(cè)器：安培檢測(cè)器

檢測(cè)模式：脈沖積分-金電極，AAA，氨基酸

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

淋洗液：甲烷磺酸溶液梯度淋洗；

柱后堿液：300mM氫氧化鈉溶液：精密移取15.7mL50%氫氧化鈉溶液，加入裝有超純水的1000mL塑料容量瓶中，加超純水定容至刻度，過(guò)濾，超聲，加氮?dú)獗Ｗo(hù)；

標(biāo)樣：L-胱氨酸；

樣品：尿液；

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密稱取胱氨酸0.1000g至100mLPMP材質(zhì)塑料容量瓶中，加1mL鹽酸使其溶解，再加水定容至刻度，混勻即得。（濃度為1000mg/L）

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密移取0.025mL、0.05mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，置于6個(gè)100mL容量瓶中，加超純水定容至標(biāo)線，混勻，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表見(jiàn)表1；

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表

1.4 樣品溶液配制

正常尿液前處理：精密移取正常尿液1mL至100mL容量瓶中,加1mL鹽酸使其溶解，再加水定容至刻度，搖勻即得。樣品過(guò)RP柱以及濾膜后進(jìn)樣分析。

模擬高胱氨酸病人尿液前處理：模擬濃度分別為300mg/L、600mg/L、900mg/L，并在4℃冷藏冰箱中過(guò)夜保存后進(jìn)行測(cè)試。精密移取模擬尿液1mL至100mL容量瓶中，加1mL鹽酸使其溶解，再加水定容至刻度，搖勻即得。樣品過(guò)RP柱以及濾膜后進(jìn)樣分析。

2 測(cè)試結(jié)果

2.1 空白測(cè)試

在測(cè)試前確保儀器穩(wěn)定以及系統(tǒng)已經(jīng)沖洗干凈，需要進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，按照“1.1“項(xiàng)測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試，得到梯度空白測(cè)試圖譜和純水測(cè)試圖譜，由圖可見(jiàn)，空白測(cè)試圖譜與純水測(cè)試圖譜中均沒(méi)有出現(xiàn)干擾。梯度空白測(cè)試圖譜見(jiàn)圖1，純水測(cè)試圖譜見(jiàn)圖2。

圖1 梯度空白測(cè)試圖譜

圖2 純水測(cè)試圖譜

2.2 標(biāo)曲測(cè)試

標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度見(jiàn)表1，按照1.1的測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊譜圖如圖3，待測(cè)離子在該色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線線性均大于0.999，線性良好，線性方程如下表2。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊色譜圖

表2 線性方程

2.3 精密度測(cè)試

按照“1.1"項(xiàng)色譜條件，分別連續(xù)注入數(shù)針0.5mg/L、5mg/L、20mg/L胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，測(cè)得樣品圖譜見(jiàn)圖4、圖5、圖6。精密度測(cè)試數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

圖4 0.5mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)6針重復(fù)性圖譜

圖5 5mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)6針重復(fù)性圖譜

圖6 20mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)6針重復(fù)性圖譜

表3 樣品連續(xù)3針測(cè)試數(shù)據(jù)

2.4 樣品測(cè)試

按照“1.1"項(xiàng)色譜條件，連續(xù)注入數(shù)針樣品溶液和模擬樣品溶液（模擬600mg/L尿液樣品）進(jìn)樣分析，樣品未檢出胱氨酸，樣品重復(fù)性譜圖見(jiàn)圖7。模擬600mg/L尿液樣品樣品重復(fù)性譜圖見(jiàn)圖8。模擬600mg/L尿液樣品樣品重復(fù)性結(jié)果及回收率見(jiàn)表4。

圖7 樣品連續(xù)6針測(cè)試重疊色譜圖

圖8 模擬600mg/L尿液樣品連續(xù)6針重復(fù)性圖譜

表4 模擬600mg/L尿液樣品樣品重復(fù)性結(jié)果及回收率

3 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)采用離子色譜脈沖安培-柱后衍生法測(cè)試尿液中的胱氨酸，測(cè)試方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定且不受干擾，運(yùn)行時(shí)間短且重復(fù)性好，回收率滿足測(cè)試要求。