胺基活化的瓊脂糖可以用于含羧基或含醛的分子。耦合化學(xué)是基于碳二亞胺的，是一項成功且有據(jù)可查的技術(shù)。
Amine-activated SepFast與含有羧基的配體形成化學(xué)穩(wěn)定的酰胺鍵，他有一個長間隔區(qū)（9個原子）。預(yù)活化的瓊脂糖基質(zhì)可以用于制造各種定制的親和層析吸附劑，適用于小規(guī)模和大規(guī)模純化應(yīng)用。
1. 屬性
Amine-activated SepFast 4 High Flow（HF）由高度交聯(lián)的4%珠狀瓊脂糖制成。它具有高機械剛度，可在降低背壓的情況下實現(xiàn)高流量。
由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結(jié)合特性，長期以來一直用于色譜分離。這些顆粒具有開孔結(jié)構(gòu)，對大蛋白質(zhì)分子具有出色的傳質(zhì)性能。
通過在末端連接帶有胺基的長親水鏈來激活基礎(chǔ)基質(zhì)。在碳二亞胺試劑存在下與含羧基配體反應(yīng)，或在還原劑存在下與含醛配體反應(yīng)。Amine-activated SepFast以20%乙醇中的水懸浮液形式提供。
表1 Amine-activated SepFast 的特性
可耦聯(lián)基團 | -COOH，CHO |
基質(zhì) | 高度交聯(lián)的4%瓊脂糖（4HF） |
粒徑 | 50-150 μm |
間隔臂 | 9個原子 |
活化水平 | 10-25 μmol amine /ml medium |
pH穩(wěn)定性 | 2-13（具有配體依賴性） |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 對偶聯(lián)配體能夠接受的所有常用的水性化學(xué)品穩(wěn)定 |
保存 | 4℃-8℃ |
2. 配體固定化
以下是含羧基配體一般的偶聯(lián)流程。
2.1 將目標(biāo)配體溶解在偶聯(lián)緩沖液中，將pH值調(diào)整為4.5。偶聯(lián)緩沖液的體積可以是固定凝膠體積的一半或相同。
2.2 在過濾裝置中用至少5 倍體積的偶聯(lián)緩沖液清洗胺活化凝膠。
2.3 將洗凈并吸干的凝膠（來自步驟 2.2）轉(zhuǎn)移到步驟2.1 制備的溶液中。
2.4 將碳二亞胺作為干粉或預(yù)先溶解的溶液添加到漿液中，最終濃度為0.1 M。如果碳二亞胺預(yù)先溶解在水中，則將pH值調(diào)整為4.5。
2.5 在室溫或4-8℃下混合漿料。
2.6 在第1個小時內(nèi)通過添加 0.1 M NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)pH值至4.5。
2.7 將偶聯(lián)反應(yīng)放置2-24小時。
2.8 用5倍體積的0.1 M 醋酸鹽緩沖液 + 0.5 M NaCl，pH 4.0洗滌凝膠，然后用5倍體積的0.1 M Tris/HCl + 0.5 M NaCl，pH 8.0洗滌凝膠。重復(fù)上述洗滌2次以上。
2.9 使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。
3. 固定化效率的一般考慮
3.1 pH
偶聯(lián)反應(yīng)在pH 4.5 - 7.5之間非常有效地進行。但是可以優(yōu)化偶聯(lián)pH以獲得最佳結(jié)果（例如，高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性）。
在偶聯(lián)反應(yīng)的第1個小時內(nèi)，pH值會降低。要記得通過添加0.1 M NaOH來調(diào)節(jié)偶聯(lián)pH值。之后pH值會趨于穩(wěn)定。
3.2 偶聯(lián)方案
去離子水可直接用作偶聯(lián)溶液。應(yīng)避免使用含有氨基、巰基或羧基的緩沖溶液，因為它們會與配體偶聯(lián)發(fā)生競爭。
可以引入稀釋的某些有機溶劑以提高配體的溶解度。應(yīng)事先測試此類溶劑的適用性。
3.3 碳二亞胺的選擇
應(yīng)使用水溶性碳二亞胺，例如1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺 (EDC) 或1?環(huán)己基?3?(2?嗎啉代乙基) 碳二亞胺 (CMC)（通常合成為 metho?p?甲苯磺酸鹽）。EDC是常用的碳二亞胺試劑。
3.4 碳二亞胺的濃度
添加的碳二亞胺的量應(yīng)以化學(xué)計量的方式超過活化的胺基。建議以最終反應(yīng)漿料中的0.1 M作為起點。
3.5 反應(yīng)時間和溫度
可以優(yōu)化偶聯(lián)過程中配體和活化介質(zhì)之間的接觸時間以保持配體的生物活性。
典型的反應(yīng)時間是在室溫或冷藏室中過夜。
3.6 屏蔽剩余的活化配體
如果加入過量的配體，則可能不需要封閉殘留的活化基團。
未與配體反應(yīng)的活化基團應(yīng)在碳二亞胺存在下通過添加含有pH 8 - 9伯胺的額外小分子（例如1 M乙醇胺）來封端。
3.7 最終介質(zhì)的洗滌
偶聯(lián)反應(yīng)后需要將未連接或弱連接的配體WAN全洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。
4. 固定化親和介質(zhì)的使用
配體偶聯(lián)介質(zhì)可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。
5. 儲存
Amine-activated SepFast應(yīng)在8℃下儲存。偶聯(lián)的濕介質(zhì)應(yīng)在防菌劑（例如20%乙醇）存在的情況下于4-8℃儲存。切勿凍存耦合介質(zhì)。
6. 更多信息
了解更多關(guān)于BioToolomics產(chǎn)品代理信息可聯(lián)系天津益元利康科技有限公司的孫經(jīng)理。
7. 訂購信息
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Amine-activated SepFast 4HF | 5 mL | 350101-5ML |
50 mL | 350101-50ML | |
1 L | 350101-1L | |
Amine-activated SepFast 6HF | 5 mL | 350301-5ML |
50 mL | 350301-50ML | |
1 L | 350301-1L |
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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